电子显微镜与光学显微镜的基本区别 分辨本领 光源 透镜真空 成像原理 人眼 100pm 可见光 光学显微镜0.2μm 可见光 利用样本对光的吸收形 (波长400~700nm) 成明暗反差和颜色变化 0.1 紫外光 玻璃透镜不要求真空 电子显微镜接近0.1mm电子束电磁透镜1.33×10-5利用样品对电子的散射 (波长0.01~0.9nm) 1.33×103Pa和透射形成明暗反差
11 电子显微镜与光学显微镜的基本区别 分辨本领 光 源 透 镜 真空 成像原理 人眼 100 μ m 可见光 光学显微镜 0.2 μ m 可见光 (波长400～700nm) 利用样本对光的吸收形 成明暗反差和颜色变化 0.1 μ m 紫外光 玻璃透镜 不要求真空 电子显微镜 接近 0.1nm 电子束 (波长 0.01～ 0.9nm) 电磁透镜 1.33×10-5～ 1.33×10 -3 Pa 利用样品对电子的散射 和透射形成明暗反差
电镜与光镜光路图比较 Viewing screen with final image 光源 电源 电源 聚光镜 透镜 国回 聚光镜 Intermediate image 样品 样品射线扫描器 一回萧可 Specimen 物镜 物镜 透镜 Condenser 样 目镜 目镜 Light microscope Electron microscope 荧光屏上荧光屏上 gure 18.12 A comparison of the lens systems of a 直接成像观察图象观察图象 light and electron microscope (From w. Agar, Principles and Practice of Electron Microscope Operation, Elsevier/ North-Holland, 1974) 光学显微镜 透射电镜 扫描电镜 12
12 电镜与光镜光路图比较 光源 聚光镜 样品 物镜 目镜 直接成像 电源 聚光镜 样品 物镜 目镜 荧光屏上 观察图象 电源 透镜 透镜 样品 荧光屏上 观察图象 射线扫描器 光学显微镜 透射电镜 扫描电镜
电子显微镜的基本构造 (inside Wehnelt Sr Anode cylinder not shown) 干申 First condenser Condenser condenser ens system 棗 Specimen Objective lens 室品 Intermediate lens 国中 窗质 Figure A-21 A Transmission Electron Microscope n camera chamber. 铜亲荧 (a)A photograph and(b) a schematic diagram of a TEM
13 电子显微镜的基本构造
主要电镜制样技术 ●超薄切片技术用于电镜观察的样本制备示意图 ●负染色技术( Negative staining) 染色背景,衬托出样品的精细结构 ●冰冻蚀刻技术( Freeze etching)(技术示意图) 冰冻断裂与蚀刻复型:主要用来观察膜断裂面 的蛋白质颗粒和膜表面结构。 ●电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合 而形成的具有重要应用前景的一门新技术。 ★电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技 术相结合,是当前结构生物学一主要研究生物大分子空间 结 构及其相互关系的主要实验手段
14 主要电镜制样技术 z超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备 示意图 z负染色技术 （Negative staining ） 染色背景，衬托出样品的精细结构 z冰冻蚀刻技术（Freeze etching） （技术示意图 ） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面 的蛋白质颗粒和膜表面结构。 z电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合 而形成的具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技 术相结合，是当前结构生物学——主要研究生物大分子空间 结 构及其相互关系的主要实验手段
扫描电镜 ●原理与应用: ●电子探针"扫描,激发样品表面放出二次电子, 探测器收集二次电子成象。 ●CO2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张 力问题
15 扫描电镜 z原理与应用： z电子“探针”扫描，激发样品表面放出二次电子， 探测器收集二次电子成象。 z CO 2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张 力问题