角家精品得程 CEN Notl Saml克隆位点 ARS 0 基因组DNA TRI Am URA3 BamHI BamHI ori 限制精肉切酶 TEL ® TEL w HIS3 n BamHI 酶解 Saml TEL TRP ARS CEN URA3 TEL 左臂 右臂 连接酶连接 TEL TRP ARSI CEN URA3 TEL 。☐ % 16
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用家精品课程 第5章基因组序列-5.1物理作图 YAC载体包括： ●一 段来自酵母染色体的着丝粒序列 一 段控制酵母DNA复制的自主复制序列 (autonomously repl icating sequence, ARS) 。一对酵母的端粒序列 。选择标记 17
遗传学 Genetics 国家精品课程 17 YAC载体包括: ●一段来自酵母染色体的着丝粒序列 ●一段控制酵母DNA复制的自主复制序列 （autonomously replicating sequence， ARS） ●一对酵母的端粒序列 ●选择标记 第5章 基因组序列-5.1 物理作图
角家精品得程 CEN4 oni SnoBl SUP4 TRP1 pYAC3 CEN4 centromere URA3 TEL telomere oni origin of replication TRP1 TEL TEL SUP4 selectable markers URA BamHl BomHl Cleave with BamHl and SnoBl Left arm Right arm Insert DNA >100kb ori TEL TRP1 CEN4 Insert URA3 TEL DNA 18
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用家精品课程 YAC载体 真核基因组DNA ARSI CEN4 Amp' on PYAC4 EcoRI局部消化 TEL BamHI 8 0 50 分离400500k1 范围的DNA片段 转化酵母细胞 在酵母人工染色体上克隆DNA YAC载体pYAC4具有一个着丝粒(CEN4)和两个来自四膜虫(Tetrahymena)的端粒(TEL).ARSI是一种相 当于复制起点的自主复制序列，此外，还有两个转化醇每细胞的选择基因URA3和TRPL,oi是一个来自 细菌的复制起点，供在细蘭细胞中生长时使用：和一个供作细苦细胞中选择标记的氨卡青霉素抗性基因(am) 19
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角家精品课程 高分 TEL AmpR ARS1 EcoRI TEL 子量 ori TRP1 CEN4 URA3 DNA EcoRI部分消化 EcoRI酶切 分子量标准 (kb) EcoRI EcoRI 500 400 300 分离400-500 200 kb的DNA片段 连接 100 PFGE 转化酵母细胞 20
遗传学 Genetics 国家精品课程 20 TEL AmpR ARS1 EcoRI TEL ori TRP1 CEN4 URA3 EcoRI EcoRI EcoRI酶切 高分 子量 DNA EcoRI部分消化 500 400 300 200 100 分子量标准 （kb） 连接 分离∼400-500 kb的DNA片段 PFGE 转化酵母细胞