P℃R林系基本组成成芬 棋板DNA 扩增片段 ●模板DNA ○特异性引物 ●一对分别与待扩增DNA序列两端互 补的寡核苷酸片段。 耐热DNA聚合酶 ●Tag DNA聚合酶 dNTPs ●含Mg2+的缓冲液
PCR体系基本组成成分 ⚫含Mg2+的缓冲液 ⚫dNTPs ⚫耐热DNA聚合酶 ⚫Tag DNA聚合酶 ⚫特异性引物 ⚫一对分别与待扩增DNA序列两端互 补的寡核苷酸片段。 ⚫模板DNA 模板DNA 基因组DNA DNA样品 待扩增片段
PR基寒反应步骤 三个步骤为一个循环， 使模板DNA完全变性成单链。 每次循环产物作为下一 同时引物自身和引物之间存在 轮模板进入下一轮循环 的局部双链得以消除 变性 使引物和模板 此温度下DNA 95°C DNA退火结合 聚合酶以dNTP 为底物催化 DNA链的延长 循环 25-30 延伸 次 退火 72°C Tm-5°
PCR基本反应步骤 变性 95˚C 延伸 72˚C 退火 Tm-5˚C 循环 25-30 次 使模板DNA完全变性成单链。 同时引物自身和引物之间存在 的局部双链得以消除 使引物和模板 此温度下DNA DNA退火结合 聚合酶以dNTP 为底物催化 DNA链的延长 三个步骤为一个循环， 每次循环产物作为下一 轮模板进入下一轮循环
必过 第一轮循环 延伸(72℃) DNA-POl5/ 53 35 C50505060305050 5/ DNA-Pol 温度
第一轮循环 5 / 3 / 3 / 5 / 5/ 5/ 5/ 5/ 引物A 引物B 变性（95℃） 60 75 85 95 90 80 70 65 55 50 45 40 35 30 ℃ 退火（60℃） 延伸（72℃） DNA-Pol DNA-Pol 温度
0 5/ 引物B 第二轮循环 延伸(72℃) DNA-Pol 5/ 3/ CS05507万 5 DNA-Pol DNA-POI5/ 060505050 5 DNA-Pol 温度
第二轮循环 5/ 5/ 5 / 3 / 3 / 5 / 5/ 5/ 引物A 引物B 60 75 85 95 90 80 70 65 55 50 45 40 35 30 ℃ 变性（95℃） 退火（60℃） 延伸（72℃） 5/ 5/ 5/ 5/ 温度 DNA-Pol DNA-Pol DNA-Pol DNA-Pol