辅助手段和 基本内容 时间分配 其它因素一定时，©只与吸光物质的性质有关，故摩尔吸光系数是吸光 物质在特定波长和溶剂情况下的一个特征常数。值越大，有色溶液对此波 长的光的吸收能力就越强，测定的灵敏度就越高。 若溶液的浓度为质量浓度，则有： A=apl 式中：p为溶液的质量浓度：a为吸光系数(percentange absorptivity),常用 单位为gLcm。 摩尔吸光系数ε与吸光系数a之间的关系为： s=aM 式中：M为有色物质的摩尔质量。 应用朗伯一比尔定律时，需注意以下几点： (朗伯一比尔定律仅适用于单一波长的单色光。入射光的波长范围越 宽，则测定结果越容易偏离朗伯一比尔定律 (2)吸收过程中各物质间无相互作用，但各物质的吸光度具有加和性 (③)入射光波长不同时，摩尔吸光系数也不同。摩尔吸光系数越大，溶 液对入射光的吸收或越强，测定的灵制度就城高 (④)分光光度法仅适用于微量组分的测定。溶液浓度太高，结果将偏 朗伯一比尔定律，所以不能直接配制】olL这样高浓度的溶液来测定， 而是在适宜的低浓度下测定吸光度A,然后通过计算求出ε值。 第三节可见分光光度法 分光光度计 分光光度计的基本部件及相互间的关系用方框图表示如下： 光源—单色器一吸收池一检测系统 显示系统 (一)光源 一般采用6V12y的钨丝灯泡为光源，钨丝灯可发出320nm-3290n 的连续光谱，最适宜的波长范围是360mm~1000nm,可作为可见光区的光源 (二)单色器 单色器是将光源发出的连续光谱分解为单色光并可从中分出任一波 长单色光的装置，它由棱镜或光等色散元件及狭缝和透镜等组成，可获 得纯度较高的单色光。 三)吸收池 吸收池是用来盛放待测溶液和参比溶液的容器，一般为长方形。吸收 池应具有光学洁净的一对相互平行并垂直于光束的光学窗。在可见光区， 可用无色透明、耐腐蚀的光学玻璃制成的吸收池
16 基本内容 辅助手段和 时间分配 其它因素一定时，只与吸光物质的性质有关，故摩尔吸光系数是吸光 物质在特定波长和溶剂情况下的一个特征常数。值越大，有色溶液对此波 长的光的吸收能力就越强，测定的灵敏度就越高。 若溶液的浓度为质量浓度，则有： 式中：为溶液的质量浓度；a 为吸光系数(percentange absorptivity)，常用 单位为 g -1 Lcm —l。 摩尔吸光系数与吸光系数 a 之间的关系为： 式中：M 为有色物质的摩尔质量。 应用朗伯—比尔定律时，需注意以下几点： (1)朗伯—比尔定律仅适用于单一波长的单色光。入射光的波长范围越 宽，则测定结果越容易偏离朗伯—比尔定律。 (2)吸收过程中各物质间无相互作用，但各物质的吸光度具有加和性。 (3)入射光波长不同时，摩尔吸光系数也不同。摩尔吸光系数越大，溶 液对入射光的吸收就越强，测定的灵敏度就越高。 (4)分光光度法仅适用于微量组分的测定。溶液浓度太高，结果将偏离 朗伯—比尔定律，所以不能直接配制 1 molL -1 这样高浓度的溶液来测定， 而是在适宜的低浓度下测定吸光度 A，然后通过计算求出值。 第三节 可见分光光度法 一、分光光度计 分光光度计的基本部件及相互间的关系用方框图表示如下： (一)光源 一般采用 6V~12V 的钨丝灯泡为光源，钨丝灯可发出 320nm~3290nm 的连续光谱,最适宜的波长范围是360nm~1000nm，可作为可见光区的光源。 (二)单色器 单色器是将光源发出的连续光谱分解为单色光并可从中分出任一波 长单色光的装置，它由棱镜或光栅等色散元件及狭缝和透镜等组成，可获 得纯度较高的单色光。 (三)吸收池 吸收池是用来盛放待测溶液和参比溶液的容器，一般为长方形。吸收 池应具有光学洁净的一对相互平行并垂直于光束的光学窗。在可见光区， 可用无色透明、耐腐蚀的光学玻璃制成的吸收池。 15 15 A = a l = aM 光 源 单色器 吸收池 检测系统 显示系统
基本内容 辅助手段和 时间分配 (四)检测系统 在分光光度计中，利用光电管将透过吸收池的光转换成电流，经放大 器放大后由灵敏度很高的检测计测量。 (五)显示系统 显示系统的作用是光电流或放大的信号以适当的方式显示或记录下米。 二、定量分析方法 通常选择波长为的单色光为入射光，在分光光度计上测出试样溶 的吸光度，根据朗伯-比尔定律求出试样溶液的浓度。在测量溶液的吸》 度时，为了消除溶剂或其它有色物质的影响，必须采用空白溶液（又称参 比溶液)做对照。先将空白溶液置于光路中，调节仪器使A=0(T=100%) 然后再将被测溶液置于光路中，即可读出被溶液的吸光度。常用的空 溶液有(1)溶剂做空白溶液的溶剂空白，(2)不加试样溶液而按显色反 应相同的条件加入各种试剂和溶剂后得到的试剂空白等。 分光光度法常用的定量分析方法有标准比较法和标准曲线法 (一)标准比较法 c.=c,A./A, (8-5) 标准比较法简单方便，但标准溶液与被测试样的浓度必须相近，否则误差 大 (二)标准曲线法 配制一系列浓度不同的标准溶液，在最大吸收波长处分别测量它们的 吸光度。以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标做图，所得 的曲线称为标准曲线，又称工作曲线。然后在相同条件下测量待测溶液的 吸光度，就可以从标准曲线上查得待测溶液的浓度，这种分析方法称为标 准曲线法。 第四节提高测量灵敏度合准确度的方法 一、分光光度法的误差 二、选择适当的显色剂 在分析时，应洗择活当的显色反应，通常应考虑以下因素： (I)灵敏度高，即选择能使生成的有色物质的ε较大的反应，一般ε 10 值应达到104105. (2)选择性好，指显色剂仅与一个组分或少数几个组分发生显色反 应。在实际分析应用中，多选择仅与被测组分显色而不与其它离子显色的 反应。 (3)显色剂在测定波长处无明显吸收。 (4)反应生成的有色化合物组成恒定
17 基本内容 辅助手段和 时间分配 (四) 检测系统 在分光光度计中，利用光电管将透过吸收池的光转换成电流，经放大 器放大后由灵敏度很高的检测计测量。 (五) 显示系统 显示系统的作用是光电流或放大的信号以适当的方式显示或记录下来。 二、定量分析方法 通常选择波长为max 的单色光为入射光，在分光光度计上测出试样溶液 的吸光度，根据朗伯-比尔定律求出试样溶液的浓度。在测量溶液的吸光 度时，为了消除溶剂或其它有色物质的影响，必须采用空白溶液(又称参 比溶液)做对照。先将空白溶液置于光路中，调节仪器使 A＝0(T＝100％)， 然后再将被测溶液置于光路中，即可读出被溶液的吸光度。 常用的空白 溶液有（1）溶剂做空白溶液的溶剂空白，（2）不加试样溶液而按显色反 应相同的条件加入各种试剂和溶剂后得到的试剂空白等。 分光光度法常用的定量分析方法有标准比较法和标准曲线法。 (一)标准比较法 标准比较法简单方便，但标准溶液与被测试样的浓度必须相近，否则误差 较大。 (二)标准曲线法 配制一系列浓度不同的标准溶液，在最大吸收波长处分别测量它们的 吸光度。以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标做图，所得 的曲线称为标准曲线，又称工作曲线。然后在相同条件下测量待测溶液的 吸光度，就可以从标准曲线上查得待测溶液的浓度，这种分析方法称为标 准曲线法。 第四节 提高测量灵敏度合准确度的方法 一、分光光度法的误差 二、选择适当的显色剂 在分析时，应选择适当的显色反应，通常应考虑以下因素： （1） 灵敏度高，即选择能使生成的有色物质的较大的反应，一般 值应达到 104~105。 （2） 选择性好，指显色剂仅与一个组分或少数几个组分发生显色反 应。在实际分析应用中，多选择仅与被测组分显色而不与其它离子显色的 反应。 （3）显色剂在测定波长处无明显吸收。 （4）反应生成的有色化合物组成恒定。 三、选择合适的测定条件 四、共存离子的干扰和消除 30 10 5 c c A / A (8 5) x = s x s −