核磁共振基本原理8讲 吴季辉 样品的处理 离心:样品(特别是生物大分子)溶解后,应该离心 除去可能的微小颗粒,以免影响匀场,降低分辨率 除氧:在高分辨结构和弛豫研究中除氧是极为重要的 (特别是小分子),溶解在溶液中的分子氧具有顺磁 性,它会极大的减少弛豫时间,必须将氧除去。除氧 的方法通常有两种,一种叫冰冻一抽真空一融化:即把 样品放在NMR样品管内冰冻,然后抽真空,融化,重 复上述过程四次,最后在真空中将管口封住。另一种 方法是将氮气或氦气,氩气强迫通过整个样品体积把 氧赶走
样品的处理 离心：样品（特别是生物大分子）溶解后，应该离心 除去可能的微小颗粒，以免影响匀场，降低分辨率 除氧：在高分辨结构和弛豫研究中除氧是极为重要的 （特别是小分子），溶解在溶液中的分子氧具有顺磁 性，它会极大的减少弛豫时间，必须将氧除去。除氧 的方法通常有两种，一种叫冰冻－抽真空－融化: 即把 样品放在NMR样品管内冰冻，然后抽真空，融化，重 复上述过程四次，最后在真空中将管口封住。另一种 方法是将氮气或氦气，氩气强迫通过整个样品体积把 氧赶走 核磁共振基本原理 8讲 吴季辉
核磁共振基本原理8讲 吴季辉 核磁共振谱仪的主要指标 分辨率( resolution) 谱仪的分辨率被定义为能区分两个接近的共振峰的能力, 和一般光谱仪不一样它不是由能区分的最小频率间距 U1-U2表示,因为1υ1-U2与仪器的频率有关,250MHz 的谱仪可以区分的频率间距自然大于60MHz谱仪。核磁 共振谱仪的分辨率受到谱线宽度的限制,谱线不是无限 窄的,它有一定的宽度,用共振峰半高处的宽度表示 表观线宽不仅取决于弛豫过程,而且取决于仪器本身 老式的谱仪用10%(ⅴ/V)的邻二氟苯/四氯化碳作为标样, 测定某条指定的谱线的半高宽,大致在0.1-0.5Hz 现代的FT谱仪用1-3%氯仿/氘代丙酮作为标样,测定氯仿 主峰的半高宽
核磁共振谱仪的主要指标 分辨率(resolution) 谱仪的分辨率被定义为能区分两个接近的共振峰的能力， 和一般光谱仪不一样它不是由能区分的最小频率间距 1 -2 表示，因为1 -2 与仪器的频率有关，250MHz 的谱仪可以区分的频率间距自然大于60MHz谱仪。核磁 共振谱仪的分辨率受到谱线宽度的限制，谱线不是无限 窄的，它有一定的宽度，用共振峰半高处的宽度表示。 表观线宽不仅取决于弛豫过程，而且取决于仪器本身 老式的谱仪用10%(v/v)的邻二氟苯/四氯化碳作为标样， 测定某条指定的谱线的半高宽，大致在0.1-0.5Hz 现代的FT谱仪用1-3%氯仿/氘代丙酮作为标样，测定氯仿 主峰的半高宽 核磁共振基本原理 8讲 吴季辉
核磁共振基本原理8讲 吴季辉 5HZ 56 509 0.15HZ 8.05 8.00 图72-1邻二氟苯的四氯化碳溶液的NMR谱 氯仿/氘代丙酮的NR谱
氯仿/氘代丙酮的NMR谱 核磁共振基本原理 8讲 吴季辉
核磁共振基本原理8讲 吴季辉 核磁共振谱仪的主要指标 线型( lineshape) 仅仅最小线宽还不足以表征分辨率,特别是所观察的两个 峰高度相差甚大时,这时分辨率在很大程度上受到强峰接 近基线处形状的影响。这时还要进行一种波峰检验(Hump test 老式的谱仪用10%(v/v)的氯仿/四氯化碳作为标样,测定氯 仿主峰的0.5%处即13C卫星线高度处谱线的宽度,大致在7 1 5Hz 现代的FT谱仪用1-3%氯仿/氘代丙酮作为标样,测定氯仿主 峰的0.55%及0.1%处谱线的宽度
核磁共振谱仪的主要指标 线型(lineshape) 仅仅最小线宽还不足以表征分辨率，特别是所观察的两个 峰高度相差甚大时，这时分辨率在很大程度上受到强峰接 近基线处形状的影响。这时还要进行一种波峰检验(Hump test) 老式的谱仪用10%(v/v)的氯仿/四氯化碳作为标样，测定氯 仿主峰的0.5%处即13C卫星线高度处谱线的宽度，大致在7- 15Hz 现代的FT谱仪用1-3%氯仿/氘代丙酮作为标样，测定氯仿主 峰的0.55%及0.11%处谱线的宽度 核磁共振基本原理 8讲 吴季辉
核磁共振基本原理8讲 吴季辉 50Hz (a) R 13C卫星线指与13C 相耦合的质子产生的 线 旋转边带样品旋 转时由于磁场不够均 匀而在强峰两边产生 的弱峰,与主峰的距 R 小认HM 离为旋转速度的倍数 图72-2波峰检验。 (a)旋转速度54H,(b)旋转速度29Hz
13 C卫星线 指与13 C 相耦合的质子产生的 谱线 旋转边带 样品旋 转时由于磁场不够均 匀而在强峰两边产生 的弱峰，与主峰的距 离为旋转速度的倍数 核磁共振基本原理 8 讲 吴季辉