锁场 ·采用氘核内锁稳定磁场,起锁场的作用 氘代氯仿是一个很理想的溶剂,它既适 合于H,也适合于1C,在整个质子谱范 围内透明,再加上化学性质惰性,便宜 所以是常用的溶剂 HO是生物分子最适宜的溶剂 (909H2O,10%D2O)
锁场 • 采用氘核内锁稳定磁场，起锁场的作用 • 氘代氯仿是一个很理想的溶剂，它既适 合于1H，也适合于13C，在整个质子谱范 围内透明，再加上化学性质惰性，便宜， 所以是常用的溶剂 • H2O 是生物分子最适宜的溶剂 (90%H2O,10%D2O)
Common reference compounds: DSS (for biomolecular work 3-(trimethylsilyl)-propanesulfonic acid, sodium salt TMS (for organic solvents) Tetramethylsilane,(CH3)4Si other nuclei should be referenced indirectly using the e factor See J. L Markley, Y Arata, A, Bax, C W. Hilbers, R. Kaptein, B D. Sykes, P.E. Wright, and K. Wuethrich. "Recommendations for the Presentation of NMr Structures of proteins and Nucleic Acids,Pure Appl. Chem. 70, 117-142 (1998)
核磁共振基本原理8讲 吴季辉 蛋白质NMR研究的溶液条件 选择的pH值尽量在偏酸性如pH3~5,也可 以稍为高一些,但尽量不要大于7。这是 因为蛋白质中的酰胺质子NH在pH3~5之 间与水的交换最慢,在其他pH特别是7以 上交换加快,导致NH的信号减弱甚至消 失,而NH的信息对于蛋白质主链乃至侧 链谱峰的认证都十分重要
蛋白质NMR研究的溶液条件 选择的pH值尽量在偏酸性如pH 3~5，也可 以稍为高一些，但尽量不要大于7。这是 因为蛋白质中的酰胺质子NH在pH 3~5之 间与水的交换最慢，在其他pH特别是7以 上交换加快，导致NH的信号减弱甚至消 失，而NH的信息对于蛋白质主链乃至侧 链谱峰的认证都十分重要 核磁共振基本原理 8讲 吴季辉
缓冲体系的成份首先要保证蛋白质的 稳定及高溶解度,蛋白质的浓度通 常要求有数mM 其次要考虑缓冲液中其他成份对蛋白 质谱图的干扰,在这方面磷酸盐缓 冲液最好,其他的如Tris或乙酸等有 机成份由于本身也有CH质子,其化 学位移与蛋白质中的CH相近,因而 有干扰,特别是缓冲液浓度较蛋白 质高出很多时。如果作同核谱,最 好能用氘代的Tri和乙酸等;
缓冲体系的成份首先要保证蛋白质的 稳定及高溶解度，蛋白质的浓度通 常要求有数mM 其次要考虑缓冲液中其他成份对蛋白 质谱图的干扰，在这方面磷酸盐缓 冲液最好，其他的如Tris或乙酸等有 机成份由于本身也有CH质子，其化 学位移与蛋白质中的CH相近，因而 有干扰，特别是缓冲液浓度较蛋白 质高出很多时。如果作同核谱，最 好能用氘代的Tris和乙酸等；
作异核谱时影响相对小一些,但其他 有机成份也应控制在数十mM内。无 机盐浓度不宜大于数百mM,否则 会影响核磁谱仪探头的调谐。在样 品溶液中不能有重金属离子污染, 因有顺磁性会降低核磁信号的强度 和分辨率,必要时可在透析液中加 EDTA等除去
作异核谱时影响相对小一些，但其他 有机成份也应控制在数十mM内。无 机盐浓度不宜大于数百mM ，否则 会影响核磁谱仪探头的调谐。在样 品溶液中不能有重金属离子污染， 因有顺磁性会降低核磁信号的强度 和分辨率，必要时可在透析液中加 EDTA等除去