(2)维生素和某些金属离子：可维持酶的正常功 能，一般需要八种水溶性维生素和铁、铜、锌等金属离 子。 (3)无机盐离子：调节离子强度和渗透压、维持 酸碱度 (4)碳水化合物：是体外细胞的主要能源，动物 细胞通常利用葡萄糖等单糖物质。 (5)促生长因子：激素、生长因子等可促进细胞 增殖生长，维持某些细胞的特殊功能。 (6)血清：大多数培养液中需加入血清，常用经 56C、30min灭活的胎牛血清、小牛血清，血清中含有多 种细胞生长因子、促贴附因子以及其它活性物质。培养 液中血清的含量一般为10-20%，才可维持细胞的正常生 长
（2）维生素和某些金属离子：可维持酶的正常功 能，一般需要八种水溶性维生素和铁、铜、锌等金属离 子。 （3）无机盐离子：调节离子强度和渗透压、维持 酸碱度。 （4）碳水化合物：是体外细胞的主要能源，动物 细胞通常利用葡萄糖等单糖物质。 （5）促生长因子：激素、生长因子等可促进细胞 增殖生长，维持某些细胞的特殊功能。 （6）血清：大多数培养液中需加入血清，常用经 56℃、30min灭活的胎牛血清、小牛血清，血清中含有多 种细胞生长因子、促贴附因子以及其它活性物质。培养 液中血清的含量一般为10-20%，才可维持细胞的正常生 长
2.培养环境 培养细胞一般接种于盛有pH7.2-7.4的培养液的 器皿中，放置在36-37℃、5%C02加95%空气混合气体、 95-100%湿度的培养箱中。这种环境适合多种细菌、支 原体、真菌的生长。因此，在培养液中应加入适量的 抗生素（如青霉素、链霉素)，并在细胞培养的全过 程保持无菌操作。 其斯
2．培养环境 培养细胞一般接种于盛有pH 7.2-7.4的培养液的 器皿中，放置在36-37℃、5%CO2加95%空气混合气体、 95-100%湿度的培养箱中。这种环境适合多种细菌、支 原体、真菌的生长。因此，在培养液中应加入适量的 抗生素（如青霉素、链霉素），并在细胞培养的全过 程保持无菌操作
(二)细胞培养的基本步骤 体外培养的细胞可分为原代细胞与传代细胞： 1.定义 (1)原代细胞：是指从机体取出后直接培养的细 胞。 (2)传代细胞：是指适合在体外培养条件下继续 培养的细胞。 (3)细胞系：原代细胞一旦传代培养即称为细胞 系。 (4)细胞株：若细胞系用单细胞分离培养，由单 细胞增殖形成细胞群，则称为细胞株
（二） 细胞培养的基本步骤 体外培养的细胞可分为原代细胞与传代细胞： 1．定义 （1）原代细胞：是指从机体取出后直接培养的细 胞。 （2）传代细胞：是指适合在体外培养条件下继续 培养的细胞。 （3）细胞系：原代细胞一旦传代培养即称为细胞 系。 （4）细胞株：若细胞系用单细胞分离培养，由单 细胞增殖形成细胞群，则称为细胞株
2.细胞体外培养的一些基本理论和知识 (1)细胞周期（增殖态） G+S+G2+M G1:细胞分裂后期，DNA合成前。 S:DNA合成期，DNA增加一倍（拷贝） G2:介于S与M之间，时间短。 M:细胞有丝分裂期。 (2)不同的称谓和意义 名称 原代培养 细胞系阶段首次转化（指数生 连续细胞系（不死） 长期) 有限细胞系（死亡） 时间 0~2周 2~12周 12周以上 *50代，大约25~50周(612月)
2．细胞体外培养的一些基本理论和知识 （1）细胞周期（增殖态） G1+S+G2+M G1：细胞分裂后期，DNA合成前。 S：DNA合成期，DNA增加一倍（拷贝） G2：介于S与 M之间，时间短。 M：细胞有丝分裂期。 （2）不同的称谓和意义 名称 原代培养 细胞系阶段首次转化 （指数生 长期） 连续细胞系（不死） 有限细胞系（死亡） 时间 0~2周 2~12周 12周以上 * 50代，大约25~50周（6~12月）
原代细胞培养步骤一般如下：从动物或人体取出组 织块，剪碎，用浓度与活性适中的胰蛋白酶或胶原酶与 乙二胺四乙酸(EDTA)等将细胞消化分散（不破坏细胞 结构)，细胞计数后接种于培养器皿内，给予合适的培 养液及其它培养条件，进行静置或旋转培养。 1 大鼠超排卵卵巢组织形态与正常组织 卵泡颗粒细胞培养72小时 1-PMSG刺激后的大鼠双侧卵巢； 2-正常大鼠双侧卵巢。 引自董冰峰硕士毕业论文
原代细胞培养步骤一般如下：从动物或人体取出组 织块，剪碎，用浓度与活性适中的胰蛋白酶或胶原酶与 乙二胺四乙酸（EDTA）等将细胞消化分散（不破坏细胞 结构），细胞计数后接种于培养器皿内，给予合适的培 养液及其它培养条件，进行静置或旋转培养。 大鼠超排卵卵巢组织形态与正常组织 卵泡颗粒细胞培养72小时 1-PMSG刺激后的大鼠双侧卵巢； 2-正常大鼠双侧卵巢。 ——引自董冰峰硕士毕业论文