工具 1、限制性內切核酸酶 限制画:作用于特定(异)核苷酸序列 的磷酸二脂 Ⅰ型酶:仅EcOB和cOk两种,催化限制 性切割和修饰核苷酸2种功能 Ⅱ型酶:遗传工程中应用最广泛 Ⅲ型酶:具有特异的识别位点,识别位 点是非对称的
一、工具酶 1、限制性内切核酸酶 限制酶：作用于特定（异）核苷酸序列 的磷酸二脂酶 Ⅰ型酶：仅EcoB和EcoK两种，催化限制 性切割和修饰核苷酸2种功能 Ⅱ型酶：遗传工程中应用最广泛 Ⅲ型酶：具有特异的识别位点，识别位 点是非对称的
Ⅱ型限制性酶的基本特性 ①有特异识别和切割的序列部位 ②DNA分子上两个单链断裂的部位通 常不是直接相对的 ③断裂所形成的DNA片段常具有碱基 互补的单链尾巴(粘性末端) ④内切酶的切割和修飾功能由两个 不同的酶催化所完成。即内切酶 活性和甲基化作用活性是分开的
Ⅱ型限制性酶的基本特性： ① 有特异识别和切割的序列部位 ② DNA分子上两个单链断裂的部位通 常不是直接相对的 ③ 断裂所形成的DNA片段常具有碱基 互补的单链尾巴（粘性末端） ④ 内切酶的切割和修饰功能由两个 不同的酶催化所完成，即内切酶 活性和甲基化作用活性是分开的
5=8As=8:5—8A- 53 G AATTG 回纹序列 二 cttaa 35 5′= GAATTC一3 3 cTtaA 5 限制性内切酶B的酶切位点及酶切产物连接
限制性内切酶EcoRI的酶切位点及酶切产物连接 G CTTAA 5´ 3´ GAATTC CTTAAG 5´ 3´ 3´ 5´ GAATTC CTTAAG 5´ 3´ 3´ 5´ AATTC G 5´ 3´ AATTC TTAAG 5´ G 3´ C 5´ 3´ a b 回纹序列
细菌质粒 CG 哺乳动物DNA GCA ACGT ACGT TGCA-------TGCA 限制性内切核酸酶 ------ACG T ACG GCA GCA---------T 混合、退火、加入 DNA连接酶 细菌哺乳动物杂合质粒 图12-1通过用相同的限制性內切酶切割 形成一个重组DNA分子
图12-1通过用相同的限制性内切酶切割 形成一个重组DNA分子
5CCCGGG--3 3一 GGGCCO-5 平齐末端 5一CCC GGG-3 3一GGG CCC一5 限制性内切酶Sma的识别及酶切位点
限制性内切酶SmaI的识别及酶切位点 CCCGGG GGGCCC 5 CCC GGG GGG CCC , 3 , 3 , , 5 , 5 , 5 平齐末端