1、要求学生掌握常用培养基的制备过程 2、要求学生掌握培养基pH的测定和调节方法 二、设备材料： 灭菌锥形瓶烧杯试管平皿天平高压灭菌器过滤装置漏斗纱布电炉 玻棒新鲜牛肉或牛肉浸膏蛋白胨磷酸氢二钾氯化钠琼脂蒸馏水0.1moln 氢氧化钠溶液精密pH试纸等 三、实验实训内容： (·)基础培养基的制备： 1、普通肉汤培养基：用新鲜牛肉先制成肉浸液。取新鲜牛肉去脂肪和筋膜，切成小块， 称重，按肉水比1：2的比例加水浸泡过夜（夏季应置于冰箱内），煮沸约h后用纱布 滤去肉渣挤出肉水，然后用滤纸过滤肉浸液，补足原有水量，装入锥形瓶中用高压灭菌 器灭菌(0.105Mpa,20min)后，置阴凉暗处保存。取上述肉浸液1000ml于锥形瓶中， 称取蛋白胨10g、磷酸氢二钾1g,氯化钠5g,加入肉浸液中充分搅拌溶解，必要时可稍 加温促进溶解。测定和调整pH为7.4-7.6，用滤纸过滤，置高压过滤器内灭菌(0.105Mpa, 20min)后，于无菌室或超净台内分装于试管内，每管约10ml,无此设备者可先分装后 灭菌。如无新鲜牛肉，也可用牛肉浸膏代替。用量是每1000ml培养基3一5g。 2、普通琼脂培养基：取1000ml普通肉汤培养基于烧杯中，加入20一30g琼脂，煮沸使 琼脂充分融化，趁热用2一4层纱布过滤，补充蒸馏水至1000ml,测定和调节pH至所 需标准。高压灭菌后无菌分装于试管（装量为14一13管）中趁热斜置，冷却即成琼脂 斜面：或分装平皿（厚度为2一3mm)中，水平静置冷却即成琼脂平板。也可先分装于 试管中，再进行高压灭菌，然后趁热斜置冷却。 (二)营养培养基的制备： 1、鲜血琼脂培养基：亦称为血液琼脂培养基。将灭菌后的普通琼脂培养基加热溶解， 冷却至45一50℃时加入无菌鲜血（每100ml普通琼脂中加入鲜血5一6ml),摇匀后趁热 分装于试管中制成斜面，或分装于平皿中制成平面。若温度过高时加入鲜血，则血液变 为暗褐色，称为巧克力琼脂。 2、血清琼脂培养基：方法同鲜血琼脂培养基，血清用量是每100ml普通琼脂中加入5 -6ml。 (三)其他常用培养基的制备： 1、半固体培养基：制备方法同普通琼脂，只是将琼脂的用量减少为0.5%一0.7%。 2、马铃薯琼脂培养基：马铃薯200g,去皮后切成小块，加蒸馏水煮沸30min,用4层 纱布过滤，加入葡萄糖20g,加入融化后补充蒸馏水至1000ml,调节pH至4.5，灭菌后 分装即可。主要用于霉菌和担子菌的分离培养。 3、麦抗凯琼脂培养基：蛋白胨2g、乳糖1g、氯化钠0.5g、胆盐0.5g、1%中性红水溶 液0.5ml、蒸馏水加至1000ml
1、要求学生掌握常用培养基的制备过程 2、要求学生掌握培养基 pH 的测定和调节方法 二、设备材料： 灭菌锥形瓶 烧杯 试管 平皿 天平 高压灭菌器 过滤装置 漏斗 纱布 电炉 玻棒 新鲜牛肉或牛肉浸膏 蛋白胨 磷酸氢二钾 氯化钠 琼脂 蒸馏水 0.1 mol/l 氢氧化钠溶液 精密 pH 试纸等 三、实验实训内容： （一）基础培养基的制备： 1、普通肉汤培养基：用新鲜牛肉先制成肉浸液。取新鲜牛肉去脂肪和筋膜，切成小块， 称重，按肉水比 1：2 的比例加水浸泡过夜（夏季应置于冰箱内），煮沸约 1h 后用纱布 滤去肉渣挤出肉水，然后用滤纸过滤肉浸液，补足原有水量，装入锥形瓶中用高压灭菌 器灭菌（0.105Mpa，20min）后，置阴凉暗处保存。取上述肉浸液 1000ml 于锥形瓶中， 称取蛋白胨 10g、磷酸氢二钾 1g，氯化钠 5g，加入肉浸液中充分搅拌溶解，必要时可稍 加温促进溶解。测定和调整 pH 为 7.4-7.6，用滤纸过滤，置高压过滤器内灭菌（0.105Mpa， 20min）后，于无菌室或超净台内分装于试管内，每管约 10ml，无此设备者可先分装后 灭菌。如无新鲜牛肉，也可用牛肉浸膏代替。用量是每 1000ml 培养基 3－5g。 2、普通琼脂培养基：取 1000ml 普通肉汤培养基于烧杯中，加入 20－30g 琼脂，煮沸使 琼脂充分融化，趁热用 2－4 层纱布过滤，补充蒸馏水至 1000ml，测定和调节 pH 至所 需标准。高压灭菌后无菌分装于试管（装量为 1/4－1/3 管）中趁热斜置，冷却即成琼脂 斜面；或分装平皿（厚度为 2－3mm）中，水平静置冷却即成琼脂平板。也可先分装于 试管中，再进行高压灭菌，然后趁热斜置冷却。 （二）营养培养基的制备： 1、鲜血琼脂培养基：亦称为血液琼脂培养基。将灭菌后的普通琼脂培养基加热溶解， 冷却至 45－50℃时加入无菌鲜血（每 100ml 普通琼脂中加入鲜血 5－6ml），摇匀后趁热 分装于试管中制成斜面，或分装于平皿中制成平面。若温度过高时加入鲜血，则血液变 为暗褐色，称为巧克力琼脂。 2、血清琼脂培养基：方法同鲜血琼脂培养基，血清用量是每 100ml 普通琼脂中加入 5 －6ml。 （三）其他常用培养基的制备： 1、半固体培养基：制备方法同普通琼脂，只是将琼脂的用量减少为 0.5%－0.7%。 2、马铃薯琼脂培养基：马铃薯 200g，去皮后切成小块，加蒸馏水煮沸 30min，用 4 层 纱布过滤，加入葡萄糖 20g，加入融化后补充蒸馏水至 1000ml，调节 pH 至 4.5，灭菌后 分装即可。主要用于霉菌和担子菌的分离培养。 3、麦抗凯琼脂培养基：蛋白胨 2g、乳糖 1g、氯化钠 0.5g、胆盐 0.5g、1％中性红水溶 液 0.5ml、蒸馏水加至 1000ml
4、SS琼脂培养基：蛋白陈5g、牛肉浸音5g、乳糖10g、胆盐10g、枸機酸钠10-14g 硫代硫酸钠8.5g、枸橼酸铁0.5g、0.5%中性红水溶液4.5ml、0.1%亮绿溶液0.33ml、琼 脂25-33g、蒸馏水加至1000ml。 (四)pH测定法： 1、精密pH试纸法：取该试纸一条浸入欲测的培养基中，0.5s后取出与标准比色卡比较， 如为酸性，滴加1moM氢氧化钠溶液至pH在所需范围之间。在滴加1moM氢氧化钠溶 液时，应充分摇匀，再用试纸测定。 2、标准比色管法：一般细菌生长的pH为7.6-7.8，测定方法如下： (1)取大小相同的比色管4支，每管分别加入不同的溶液：①培养基管（对照管）加 肉汤培养基5ml:②标准比色管：③加有指示剂的培养基管（内装5ml肉汤培养基和0.02% 酚红指示剂0.25ml)④蒸馏水管。 (2)对光观察：比较两侧观察孔内颜色是否相同，若培养基为酸性（一般为酸性），则 向③管内慢慢滴入滴加0.lmol1氢氧化钠溶液，每滴一次，将试管内液体摇匀，直至 ④两管相加的颜色与①②两管相同为止。 (3)记录5ml培养基用去滴加0.Imol氢氧化钠溶液的用量，按下列公式计算培养基 总量中需加滴加Imol/氢氧化钠溶液的用量。 全部培养基加滴力 5ml 培养基所需 培养基总毫升 1molM氢氧化钠溶液 23 4 B 养基的分装装置与棉塞 四、教学组织：实验2-3人一组，教师认真讲解操作规程，边讲解边示 范，学生理解、操作，在学生基本清楚的下，教师进行分别指导教学。 五、作业：1、实验报告。2、心得体会。 实验实训五 细菌的分离培养及培养性状的观察
4、SS 琼脂培养基：蛋白胨 5g、牛肉浸膏 5g、乳糖 10g、胆盐 10g、枸橼酸钠 10－14g、 硫代硫酸钠 8.5g、枸橼酸铁 0.5g、0.5％中性红水溶液 4.5ml、0.1%亮绿溶液 0.33ml、琼 脂 25－33g、蒸馏水加至 1000ml。 （四）pH 测定法： 1、精密 pH 试纸法：取该试纸一条浸入欲测的培养基中，0.5s 后取出与标准比色卡比较， 如为酸性，滴加 1mol/l 氢氧化钠溶液至 pH 在所需范围之间。在滴加 1mol/l 氢氧化钠溶 液时，应充分摇匀，再用试纸测定。 2、标准比色管法：一般细菌生长的 pH 为 7.6-7.8，测定方法如下： （1）取大小相同的比色管 4 支，每管分别加入不同的溶液：①培养基管（对照管）加 肉汤培养基5ml；②标准比色管；③加有指示剂的培养基管（内装5ml肉汤培养基和0.02% 酚红指示剂 0.25ml）④蒸馏水管。 （2）对光观察：比较两侧观察孔内颜色是否相同，若培养基为酸性（一般为酸性），则 向③管内慢慢滴入滴加 0.1mol/l 氢氧化钠溶液，每滴一次，将试管内液体摇匀， 直至 ④两管相加的颜色与①②两管相同为止。 （3）记录 5ml 培养基用去滴加 0.1mol/l 氢氧化钠溶液的用量，按下列公式计算培养基 总量中需加滴加 1mol/l 氢氧化钠溶液的用量。 全部培养基加滴加 5ml 培养基所需 培养基总毫升 1/10 1mol/l 氢氧化钠溶液 0.1mol/l 氢氧化钠（ml）50 培养基的分装装置与棉塞 四、教学组织：实验 2-3 人一组，教师认真讲解操作规程，边讲解边示 范，学生理解、操作，在学生基本清楚的下，教师进行分别指导教学。 五、作业：1、实验报告。2、心得体会。 实验实训五 细菌的分离培养及培养性状的观察
一、目的要求： 1、要求学生掌握细菌的分离培养、纯化的操作机能： 2、要求学生掌握细菌在培养基上的生长特性： 二、设备材料： 恒温培养箱病料或细菌培养物接种环接种针酒精灯灭菌吸管各种细菌培 养基无水碳酸钠氢氧化钠或氢氧化钾凡士林及生理盐水 三、实验实训内容： (一)细菌的分离培养： 1、病料的采取：将新鲜肛门拭子用灭菌生理盐水洗涤，洗涤液可用于分离培养；无菌 采取新鲜粪便的中心部分，用灭菌生理盐水稀释搅匀后澄清，其上清液可用于分离培养： 如为病理组织，可用烧红的刀片在其表面烫一下，随即用此刀片在烫过的地方切开一小 口，用灭菌接种环在切口内蘸一下即可用于分离培养。 2、平板划线分离培养：目的是将病理材料中的细菌分散，以便使细菌单在，从而发育 成单个菌落，防止长成菌苔。 (1)直接划线分离培养：点燃酒精灯后，左手持皿，底朝下，盖在上，以无名指和小 指托底，拇指、食指和中指将皿盖揭开成20度的角度，角度不宜过大，以防空气进入： 右手持接种环，在火焰上烧灼后取少许的材料涂在培养基边缘，将接种环上多余的材料 在火焰上烧掉，然后在培养基表面进行“Z”字形划线，然后将平皿盖好，倒置于恒温 培养箱中培养。 (2)分区划线分离培养：用玻璃铅笔在皿底外面划线，将培养基分成3一6个小区，持 皿方法同直接划线，但每划完一个小区应将平皿旋转一定角度，以便于划线。 平板划线操作示意图
一、目的要求： 1、要求学生掌握细菌的分离培养、纯化的操作机能； 2、要求学生掌握细菌在培养基上的生长特性； 二、设备材料： 恒温培养箱 病料或细菌培养物 接种环 接种针 酒精灯 灭菌吸管 各种细菌培 养基 无水碳酸钠 氢氧化钠或氢氧化钾 凡士林及生理盐水 三、实验实训内容： （一）细菌的分离培养： 1、病料的采取：将新鲜肛门拭子用灭菌生理盐水洗涤，洗涤液可用于分离培养；无菌 采取新鲜粪便的中心部分，用灭菌生理盐水稀释搅匀后澄清，其上清液可用于分离培养； 如为病理组织，可用烧红的刀片在其表面烫一下，随即用此刀片在烫过的地方切开一小 口，用灭菌接种环在切口内蘸一下即可用于分离培养。 2、平板划线分离培养：目的是将病理材料中的细菌分散，以便使细菌单在，从而发育 成单个菌落，防止长成菌苔。 （1）直接划线分离培养：点燃酒精灯后，左手持皿，底朝下，盖在上，以无名指和小 指托底，拇指、食指和中指将皿盖揭开成 20 度的角度，角度不宜过大，以防空气进入； 右手持接种环，在火焰上烧灼后取少许的材料涂在培养基边缘，将接种环上多余的材料 在火焰上烧掉，然后在培养基表面进行“Z”字形划线，然后将平皿盖好，倒置于恒温 培养箱中培养。 （2）分区划线分离培养：用玻璃铅笔在皿底外面划线，将培养基分成 3－6 个小区，持 皿方法同直接划线，但每划完一个小区应将平皿旋转一定角度，以便于划线。 平板划线操作示意图