核磁共振基本原理11讲 吴季辉 蛋白质三维空间结构测定 样品制备 记录核磁共振谱 谱峰归属 确定二级结构单元 约束条件的建立 从NMR数据到分子模型
蛋白质三维空间结构测定 • 样品制备 • 记录核磁共振谱 • 谱峰归属 • 确定二级结构单元 • 约束条件的建立 • 从NMR数据到分子模型 核磁共振基本原理 11讲 吴季辉
核磁共振基本原理11讲 吴季辉 NMR实验对蛋白质样品的要求 ng量级的蛋白质 ·溶解度大 高纯度 无聚集 足够稳定 大蛋白质需要15N标记或13C,15N双标记甚至, ℃C,15N叁标记
NMR实验对蛋白质样品的要求 • mg量级的蛋白质 • 溶解度大 • 高纯度 • 无聚集 • 足够稳定 • 大蛋白质需要15N标记或13C， 15N双标记甚至2H， 13C， 15N叁标记 核磁共振基本原理 11讲 吴季辉
核磁共振基本原理11讲 吴季辉 非标记蛋白的谱峰归属 进行COSY,DQF-COSY, Relay,DQ, TOCSY等一系列二维NR实验 进行氨基酸残基自旋系统的识别 ·根据蛋白质的一级结构与COSY谱中反映 的J耦合关系和 NOESY谱中反映的NOE效 应关系进行顺序识别(序列证认)
非标记蛋白的谱峰归属 • 进行COSY, DQF-COSY, Relay, DQ, TOCSY等一系列二维NMR实验 • 进行氨基酸残基自旋系统的识别 • 根据蛋白质的一级结构与COSY谱中反映 的J耦合关系和NOESY谱中反映的NOE效 应关系进行顺序识别（序列证认） 核磁共振基本原理 11讲 吴季辉
核磁共振基本原理11讲 吴季辉 自旋系统识别 根据COSY, TOCSY等二维谱揭 示的J耦合关系 根据谱峰的化学位移提供的信息
自旋系统识别 •根据COSY，TOCSY等二维谱揭 示的J耦合关系 •根据谱峰的化学位移提供的信息 核磁共振基本原理 11讲 吴季辉
核磁共振基本原理11讲 吴季辉 20种常见氨基酸残基侧链不活泼氢原子的自旋系统 CH CH CH Gly,,G Ala. A Ser.S Cys c CH AX A3x AMX MX CH Glu E GIn.Q Met M Pr。.Pt C-H CH2 AM(PT)X AM(PT)X AM(PT)X+A3 AXT2)M Val v Asp, D A3B3MX A3MX AMX AMX H HH H§ H 2 HNC/H H CH CH2 CH His H Phe F Trp, w AMX+AX。AMX+ AMX+AAXX AMX+ A(X)MP Leu L Lys, K Arg AMMXX A3B3 MPTX A3 MPT(B3)X A2(F?T2)MPX AdT2)MPX
20种常见氨基酸残基侧链不活泼氢原子的自旋系统 核磁共振基本原理 11讲 吴季辉