8.0 8,1 8.5 8.2 8.3 (6)常用缓冲液的pKa值 缓冲液 分子量 缓冲范围 8.08 7.1~79 2833 7.47 72~8.2 2093 7.15 piPes 304.3 MESE 195.2 54~6.8 a:三羟甲基氨基甲烷:;b:N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磷酸:c:3-(N-吗啉代)丙磺酸:d:N,N-双(2 乙磺酸)哌嗪;ε:2-(N-吗啉代)乙磺酸。 7.温度对常用缓冲液pH的影响 缓冲体系 pkKa20℃) △pKa/10℃ Mes 6.15 -0.110 da -0.110 PiPes -0.085
8．6 8．0 7．7 8．7 8．1 7．8 8．8 8．2 7．9 8．9 8．3 8．0 9．0 8．4 8．1 9．1 8．5 8．2 9．2 8．6 8．3 9．3 8．7 8．4 9．4 8．8 8．5 （6）常用缓冲液的 pKa 值 缓冲液 分子量 pKa 值 缓冲范围 Trisa 12.1 8.08 7.1～7.9 HEPESb 283.3 7.47 7.2～8.2 MPOSc 209.3 7.15 6.6～7.8 PIPESd 304.3 6.76 6.2～7.3 MESe 195.2 6.09 5.4～6.8 a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2 -乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。 7．温度对常用缓冲液 pH 的影响 缓冲体系 pKa(20℃) △pKa/10℃ Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110 PiPes 6.80 -0.085
Aces -0.200 -0.160 7.20 -0013 -0.200 He 8.15 -0.210 Bicine -0.180 Glycylglycine -0.280 、常用酶的配制 1.溶菌酶 用水配制成50mgm的溶菌酶溶液,分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃 2.蛋白水解酶类 贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液 温度 预处理 0.0lmolL Tris(pH7.8) 链霉蛋白 20℃(溶于 Omg/ml I mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃ 自消化b 水) 0.olmo/L Tris(pH7. 8) 20℃(溶于 蛋白酶K20mg/ml 0005mo/ L EDTA37~56℃无须预处理 0.5% SDS a:链霉蛋白酶是从链球菌( Streptomyces griseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物
Aces 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0.160 Mops 7.20 -0.013 Tes 7.50 -0.200 Hepes 7.55 -0.014 Tricine 8.15 -0.210 Tris 8.30 -0.310 Bicine 8.35 -0.180 Glycylglycine 8.40 -0.280 三、常用酶的配制 1．溶菌酶 用水配制成 50mg/ml 的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。 2．蛋白水解酶类 贮存液 贮存温度 反应浓度 反应缓冲液 温度 预处理 0.01mol/L Tris(pH7.8) 链霉蛋白 酶 a 20mg/ml -20℃（溶于 水） 1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃ 自消化 b 0.5% SDS 0.01mol/L Tris(pH7.8) 蛋白酶 K c 20mg/ml -20℃（溶于 水） 50μg/ml 0.005mol/L EDTA 37～56℃ 无须预处理 0.5% SDS a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物