一、重组DNA技术的基本工具 1.限制性内切核酸酶一“分子手术刀” (1)来源：限制性内切核酸酶又称限制酶，这类酶主要是从原核生物中 分离纯化出来的。 (2)作用及特点 ①作用：切割双链DA分子每条链中特定部位的磷酸二酯键 ②特点：具有特异性，能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使 特定部位的磷酸二酯键断开。 ③结果：产生黏性末端和平末端
一、重组DNA技术的基本工具 1.限制性内切核酸酶——“分子手术刀” (1)来源:限制性内切核酸酶又称限制酶,这类酶主要是从 中 分离纯化出来的。 (2)作用及特点 ①作用:切割双链DNA分子每条链中特定部位的 。 ②特点:具有特异性,能够识别双链DNA分子的特定 ,并使 的磷酸二酯键断开。 ③结果:产生 和 。 原核生物 磷酸二酯键 核苷酸序列 特定部位 黏性末端 平末端
名师点睛①将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个 黏性末端或平末端。 ②限制酶在识别序列中心轴线两侧切开形成的是黏性末端，而在识别序列 中心轴线处切开形成的是平末端
名师点睛①将一个基因从DNA分子上切割下来,需要切两处,同时产生4个 黏性末端或平末端。 ②限制酶在识别序列中心轴线两侧切开形成的是黏性末端,而在识别序列 中心轴线处切开形成的是平末端
2.DNA连接酶 常用类型E.coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 太肠枉菌 T4噬菌体 功能 只“缝合”黏性末端 “缝合”黏性末端和平末端 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
2.DNA连接酶 常用类型 E.coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来 源 T4噬菌体 功 能 只“缝合” “缝合” 结 果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 大肠杆菌 黏性末端 黏性末端和平末端 磷酸二酯键
3.载体 ()作用将外源基因送入细胞。 (2)种类：质粒、噬菌体、动植物病毒等。 (3)质粒作为载体的条件或特点： ①能在受体细胞中进行自我复制 。 ②有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中。 ③特殊的标记基因 ,便于重组DNA分子的筛选。 ④对受体细胞无害
3.载体 (1)作用:将外源基因送入细胞。 (2)种类:质粒、 、动植物病毒等。 (3)质粒作为载体的条件或特点: ①能在受体细胞中进行 。 ②有一个至多个 切割位点,供外源DNA片段(基因)插入其中。 ③特殊的 ,便于重组DNA分子的筛选。 ④对受体细胞无害。 噬菌体 自我复制 限制酶 标记基因
二、基因工程的基本操作程序 1.基本程序 目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变 目的基因 受体细胞性状或获得预期表达产物 等 的筛选与 的基因 获取 获取途径 人工合成 利用PCR技术扩增 构建基因文库 基因表达 组成 载体的构 目的基因、启动子、终止子及标记 基因等 建 植物细胞： 农杆菌转化法 将目的基 花粉管通道法 因导入受 方法 动物细胞：显微注射 技术（注射到受 体细胞 精卵内) 微生物细胞：感受态细胞法 通过PCR等技术检测受体细胞的染色体 DNA上是否插入了目的基因 子 水 或检测目的基因是否转录出了mRNA 目的基因 方法 利用抗原一抗体杂交 检 的检测与 鉴定 个体 测目的基因是否翻译 水平利用个体生物学水平的鉴定确定重组性状 是否表达
二、基因工程的基本操作程序 1.基本程序 预期表达产物 PCR 启动子 标记 农杆菌转化法 显微注射 插入了目的基因 转录出了mRNA 抗原—抗体杂交 基因