基因组图谱的构建 今人类基因组计划中,最终要测定人的基 因组中核苷酸的全部排列顺序。而利用 现有的DNA测序方法,每个测序反应通 常只能得到800个核苷酸的序列,这就意 味着要用很多DNA小片段的序列,才能 裝配、连接构成完整的连续DNA分子。] 2021/2/20 11
2021/2/20 11 一、基因组图谱的构建 ❖人类基因组计划中，最终要测定人的基 因组中核苷酸的全部排列顺序。而利用 现有的DNA测序方法，每个测序反应通 常只能得到800个核苷酸的序列，这就意 味着要用很多DNA小片段的序列，才能 装配、连接构成完整的连续DNA分子。]
令鸟枪射击法( shotgun)是许多小基因组 序列测定中通常采用的途径(图925) 利用构建的基因库直接测序,根据片段 之间的重复序列,就可以连接成完整的 基因组DNA。但是随着DNA片段数的增 加,最后对各片段序列的分析连接会变 得越来越复杂 2021/2/20 12
2021/2/20 12 ❖鸟枪射击法（shotgun）是许多小基因组 序列测定中通常采用的途径（图9-25）， 利用构建的基因库直接测序，根据片段 之间的重复序列，就可以连接成完整的 基因组DNA。但是随着DNA片段数的增 加，最后对各片段序列的分析连接会变 得越来越复杂
今例如当DNA片段数为n时,各片段之间可 能的重复数将达到2n2-2n。。另外,若 基因组中含有相同或相似的重复序列, 在构建、装配连续DNA分子时就睿易出现 错误,会将来源不同区段的DNA片段连接 在一起。因此,仅用鸟枪射击法不适用 于大基因组序列测定。 2021/2/20 13
2021/2/20 13 ❖例如当DNA片段数为n时，各片段之间可 能的重复数将达到2n 2-2n。。另外，若 基因组中含有相同或相似的重复序列， 在构建、装配连续DNA分子时就容易出现 错误，会将来源不同区段的DNA片段连接 在一起。因此，仅用鸟枪射击法不适用 于大基因组序列测定
在进行大规模序列测定之前,构建基因组图谱 是测定但是基因组全部核苷酸序列的重要一环。 基因组图谱可作为序列测定中制定测序方案的 依据,以便先重后轻地分析基因,锚定测知的 核酸序列在染色体上的位置。因此,在人类基 因组计划实施过程中,首先用了6年时间构建 高密度的基因组图谱,然后才进入测序工作。 有了基因组图谱之后,基因组序列测定可用下 列两种方法结合进行: 2021/2/20 14
2021/2/20 14 ❖在进行大规模序列测定之前，构建基因组图谱 是测定但是基因组全部核苷酸序列的重要一环。 基因组图谱可作为序列测定中制定测序方案的 依据，以便先重后轻地分析基因，锚定测知的 核酸序列在染色体上的位置。因此，在人类基 因组计划实施过程中，首先用了6年时间构建 高密度的基因组图谱，然后才进入测序工作。 有了基因组图谱之后，基因组序列测定可用下 列两种方法结合进行：
A:克隆连续序列法( clone contig): 将基因组DNA切割长度为0.MbMb的大 片段,克隆到YAC或BAC载体上,分别测 定单个克隆的序列,再装配、连接成连 续的DNA分子。 2021/2/20 15
2021/2/20 15 ❖A:克隆连续序列法（clone contig）： 将基因组DNA切割长度为0.1Mb~1Mb的大 片段，克隆到YAC或BAC载体上，分别测 定单个克隆的序列，再装配、连接成连 续的DNA分子