2二维凝胶电泳技术(2DE) 令又称双向电泳,是蛋白质组学研究中的核 心技术之一,是目前常用的唯一一种能够 连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的 方法 令完整的双向凝胶电泳分析,包括样品制备、 等电聚焦、平衡转移、 SDS PAGE斑点 染色、图像捕捉和图谱分析等步骤
2. 二维凝胶电泳技术(2DE) ❖ 又称双向电泳,是蛋白质组学研究中的核 心技术之一,是目前常用的唯一一种能够 连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的 方法 ❖ 完整的双向凝胶电泳分析,包括样品制备、 等电聚焦、平衡转移、SDS PAGE斑点 染色、图像捕捉和图谱分析等步骤
Figure 3. Silver stained 2-D gels from tissue samples of rabbit hearts oelectric point (pH units) Vehicle A 103 H-0- spot 78 815022-9ot2l.9pot2 46.9 spot 344 Ho 34 SuPeroxid dismutase spot ogr-0": prec (soD) 0441-0 spot 474 aB crystallin
Figure 3. Silver stained 2-D gels from tissue samples of rabbit hearts
(1)基本技术 令原理:是在相互垂直的两个方向上,分别基 于蛋白质不同的等电点和分子量,运用等 电聚焦( isoelectric focusing,F和十 烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE),把复杂的蛋白质混合物中的蛋白 在二维平面上分离展开
⑴基本技术 ❖ 原理:是在相互垂直的两个方向上,分别基 于蛋白质不同的等电点和分子量,运用等 电聚焦( isoelectric focusing,IEF)和十二 烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE),把复杂的蛋白质混合物中的蛋白 在二维平面上分离展开
☆第一向等电聚焦中使用G干胶条,将蛋 白质成分按其等电点经分离后均匀地分 布于不同的pH梯度。 第一向分离后将胶条经平衡液平衡后转 移至第二向 SDS PAGE中进行
❖ 第一向等电聚焦中使用IPG干胶条,将蛋 白质成分按其等电点经分离后均匀地分 布于不同的pH梯度。 ❖ 第一向分离后将胶条经平衡液平衡后转 移至第二向SDS PAGE中进行
(3)检测方法 ☆几个关键因素:灵敏度(检测限),线性范围,稳 定性和重复性 常用的检测方法主要有以下种:有机染料 (最常用的是考马斯亮蓝)、银染(最常用 的是碱性/二氨合银法和酸性/硝酸银法)、负 染、胶体扩散染料、有机荧光团染料、金属 螯合染料
（3）检测方法 ❖ 几个关键因素 :灵敏度 (检测限 ),线性范围 ,稳 定性和重复性 ❖ 常用的检测方法主要有以下种：有机染料 （最常用的是考马斯亮蓝）、银染（最常用 的是碱性/二氨合银法和酸性/硝酸银法）、负 染、胶体扩散染料、有机荧光团染料、金属 螯合染料