三、精液冷冻保存(-79 ℃或-196 ℃) 定义：是利用液态氮（-196 ℃） 或干冰（-79 ℃） ，作为冷源，将精子和精液冷冻成 固体，并在液态氮或干冰中作超低温永久保存。 意义（熟悉）： （１）提高优良种♂的配种效能； （２）便于冷冻精液的自动化生产； （３）便于引种； （４）加快改良和育种； （５）推进繁殖新技术的应用； （６）建立动物基因库
三、精液冷冻保存(-79 ℃或-196 ℃) 定义：是利用液态氮（-196 ℃） 或干冰（-79 ℃） ，作为冷源，将精子和精液冷冻成 固体，并在液态氮或干冰中作超低温永久保存。 意义（熟悉）： （１）提高优良种♂的配种效能； （２）便于冷冻精液的自动化生产； （３）便于引种； （４）加快改良和育种； （５）推进繁殖新技术的应用； （６）建立动物基因库
（一）精液冷冻保存原理 目前关于精液冷冻的原理普遍倾向于玻璃化 学说。 原理：利用超低温使精液和精子快速冷冻，快 速越过形成冰晶的温度范围（0-60 ℃）、精液 或精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。 同时在抗冻剂的存在下使精子免受冻伤，在温度 上升至体温精液解冻后精子能够保持完整的形态 结构、功能和受精能力
（一）精液冷冻保存原理 目前关于精液冷冻的原理普遍倾向于玻璃化 学说。 原理：利用超低温使精液和精子快速冷冻，快 速越过形成冰晶的温度范围（0-60 ℃）、精液 或精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。 同时在抗冻剂的存在下使精子免受冻伤，在温度 上升至体温精液解冻后精子能够保持完整的形态 结构、功能和受精能力
液态→固态 结晶态：缓慢降温形成。水分子有 序形成冰晶对精子有害：机械和渗 透压损伤。 玻璃态：快速降温形成。水分子无 序形成玻璃样的超微粒结晶，对精 子无害。 （0～-60℃ ）（ -15～-25℃） （ -60～-250 ℃ ） 玻璃化是可逆的，不稳定的，当缓慢升温时又 可能形成冰晶化
液态→固态 结晶态：缓慢降温形成。水分子有 序形成冰晶对精子有害：机械和渗 透压损伤。 玻璃态：快速降温形成。水分子无 序形成玻璃样的超微粒结晶，对精 子无害。 （0～-60℃ ）（ -15～-25℃） （ -60～-250 ℃ ） 玻璃化是可逆的，不稳定的，当缓慢升温时又 可能形成冰晶化
1、冷冻时细胞的损伤 ▪ 冰晶：在0～-60℃低温区，缓慢降温条件下 形成的，降温越慢，冰晶越大，-15～-25℃ 对精子危害最大。冰晶的形成对精子造成的 机械损伤和渗透压损伤是引起精子死亡的主 要物理因素。 ▪ 玻璃化：在-60～-250 ℃超低温区，从冰晶化 区域内开始，就快速降温，迅速越过冰晶化 进入玻璃化阶段，此阶段对精子无害。 2、添加冷冻保护剂（甘油，DMSO等） ▪ 作用：增强精子抗冻能力，并对防止冰晶发 生起到重要作用
1、冷冻时细胞的损伤 ▪ 冰晶：在0～-60℃低温区，缓慢降温条件下 形成的，降温越慢，冰晶越大，-15～-25℃ 对精子危害最大。冰晶的形成对精子造成的 机械损伤和渗透压损伤是引起精子死亡的主 要物理因素。 ▪ 玻璃化：在-60～-250 ℃超低温区，从冰晶化 区域内开始，就快速降温，迅速越过冰晶化 进入玻璃化阶段，此阶段对精子无害。 2、添加冷冻保护剂（甘油，DMSO等） ▪ 作用：增强精子抗冻能力，并对防止冰晶发 生起到重要作用
（二）精液冷冻保存稀释液 除与精液低温保存液相同外，尚需用加抗冻剂。 1、牛用：主要有卵黄-柠檬酸钠-甘油液，卵 黄-糖类-甘油液，奶类-甘油液等3种。甘油浓 度以5%-7%为宜。 2、猪用：一般采用以葡萄糖、乳糖、蔗糖、 甘油为主要成分的稀释液，甘油浓度以1%-3% 为宜
（二）精液冷冻保存稀释液 除与精液低温保存液相同外，尚需用加抗冻剂。 1、牛用：主要有卵黄-柠檬酸钠-甘油液，卵 黄-糖类-甘油液，奶类-甘油液等3种。甘油浓 度以5%-7%为宜。 2、猪用：一般采用以葡萄糖、乳糖、蔗糖、 甘油为主要成分的稀释液，甘油浓度以1%-3% 为宜