■人们已利用显微注射法将胸苷激酶基因、生长激素基 因和鼠myc基因转入了哺乳动物细胞。这种方法不仅示 可以获得转基因动物所用的转基因动物细胞，而且也 可以通过哺乳动物细胞来生产有用的蛋白质。（目前认 为胃癌、乳腺癌、结肠癌、宫颈癌、何杰金氏病及头部肿瘤等 都有myc基因的扩增或过度表达) ·小鼠和兔的受精卵原核在普通显微镜下容易看到，而 绵羊，尤其是猪和牛的卵细胞质稠密，不能看到原核。 Hammer等用千涉相差显微镜可观察到80%的绵羊卵 核，而猪和牛的卵子需经离心处理再用干涉相差显微 镜才能观察到卵原核，离心处理后的多数受精卵仍能 正常发育
Gene extraction Embryo implanted mn uterus of surogate mother Offspring 4) 43 Transgenic Mice
(二)精子载体法 ■方法：将成熟的精子与带有外源DNA的载体进行共培育之后，使 精子有能力携带外源DNA进入卵中，使之受精，并使外源DNA 整合于染色体中。 ■Bracet等(1971)将家兔精液和放射性标记的SV40病毒DNA孵 育后，在精子头部能够检测到放射活性，病毒DNA在受精过程 中被带入了卵细胞。 ·Lavitravo等(1989)把质粒与小鼠的附睾精子共孵育30min,进 行体外授精和移植，结果获得250个后代中，30%的为阳性， 部分小鼠表达了CAT基因并传到F1代。这一方法在转基因鼠上 的应用使人们看到转基因动物效率提高的希望。 ■影响DNA与精子结合的因素可能是获得成功的关键性因素，首 先哺乳动物精子吸附外源DNA需特定的时期；其次精子吸附 DNA时精子活性及DNA性质都受影响。 ·利用精子作为基因转移的工具，在实践中存在许多问题，但此 技术至少在构思上对于大动物转基因研究具重要意义
(曰)ES细胞介导的转基因动物生产弧 ·胚胎干细胞(embryonic stem cel)是指当受精卵分裂发育成壅、 胚时内细胞团的细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多 向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导 分化为机体几乎所有的细胞类型。胚胎干细胞注入寄主胚泡后， 参与胚胎形成，进入嵌合体动物的生殖系统。 ■用DNA转染法或反转录病毒介导法可将基因导入胚胎干细胞， 选出带有目的基因的细胞克隆，然后导入受体胚胎。由此法生成 的后代都是嵌合体，若由这些嵌合体胚胎中再分离出干细胞，用 核移植技术将其细胞核植入无核卵细胞，这样可以提高转基因的 效率。 ·生物学中嵌合体是指同一个体中不同基因型的组织相互接触而存在的现象
培养 早期胚胎 88 S细胞 外源转入基因 「以噬菌体或病毒为载体 ○○o转染 的重组DNA分子引入受 体细胞的过程 ⊙ ⊙ 注射到早期胚胎 移植到母体子官 。∽