3.国外经常取用二种近交系的杂交一代(F1)作为模型。其个体之间均一性好，对实验的耐受性强，又多少克服了近交系的缺点。但盲 目引进F1代动物对复制所要求的模型是缺乏意义的， (伍)动物进化的高级程度并不意味着所有器官和功能接近于人的程度 复制动物模型时，在条件允许的情况下，应尽量考虑选用与人相似、进化程度高的动物作模型。但不能因此就认为进化程度越高等的动物 其所有器官和功能越接近于人。例如，非人灵长类诱发动脉粥样硬化时，病变部位经常在小动脉、即使出现在大动脉也与人类分布不同。据报 导用鸽(White Gameau Pigeon)作这类模型时，胸主动脉出现的黄斑面积可达10%，镜下变化与人也比较相似，因此也广泛被研究者使 用。 (六)正确地评估动物疾病模型 应该懂得设有一种动物模型能完全复制人类疾病真实情况，动物毕竟不是人体的缩影。模型实验只是一种间接性研究，只可能在一个局郎 或几个方面与人类疾病相似。因此，模型实验结论的正确性只是相对的，最终必须在人体身上得到验证。复制过程中一旦出现与人类疾病不同 的情况，必须分析其分歧范围和程度，找到相平行的共同点，正确评估哪些是有价值的。 总之，动物疾病模型这门新兴的科学正吸引着各个领域专业人员投身于这项开发工作，无论医学家、兽医学家还是生物学家，要复制动物 模型还必须学习有关知识，精于选用已知的各种模型和开发新的模型，这也应该是研究者的一项基本技能。 第四节动物模型的复制方法 一、复制方法和应用 动物疾药模型的复制是用人为的方法使动物在一定的致纯因泰（物理的化学的生物的作用下造成动物组织器官或全身一定 出现某些类似人类疾病的 、形态结构方面的变化或各种疾病 ,通过这种手段来研究 发展规律，为研究人类 前我 )提供理论依据， 7 属于实验 范璃) 用 它着更于研究用 目的是过疾病的复制去深讨 病的病 病原。 验治疗学则完全不同， 物 的和色 学因 细 病原 正常动物发生疾病】 种细菌、病毒于敏 行病学、病理学 并发 分了解动物与 肠道病毒是细小病毒，而人对细 物因素是多方面的 如在 刀作用 脑损伤、骨折等模型 压变 动复制高空病 潜水病 温度改变产生各种烧份 和冻伤：放 :噪音刺激引起听 及改变行为记忆功能等。 的不同的刺 即按设计要求摸索有 如用扩张的气囊在颅内加压 作急性顿内压增高症云 应该按不网压力梯度通过几小时逐步加 的项应性发生 变后才出现 脑缺血-脑水种“的恶性循环言日加压会急速发生跨疝死亡 不可能复制出脑水肿对机体代偿和失代偿的病理生理过程，这样 的模型会丧失或缺乏 研究的价值 化学因素可直接或间接（通过代谢产物）对机体产生有害作用。如用各种化学致癌剂诱发各种肿瘤：用各种化学毒物或毒气诱发各种中毒 性疾病用强碱。强酸可致皮肤烧伤等 不同品种、不同年龄的动物也存在剂量、耐受性和副作用等差异。实验者需要通过广泛收集有关信息，在预实验中摸索稳定而有效的实验 条件。研究者可根据研究目的需要，选择相应的实验方法，在健康的动物身上复制出所需要的疾病模型。诱发性疾病模型已知有数干种，复制 的方法也是多种多样的，这里仅对一些常用的、经典的人类疾病的动物模型复制方法加以简介 二、肿瘤模型的复制方法 复制动物钟密的方法很多，如将实验动物用放射线照时或静脉、局部注时放时性园位素：使用各种化学致德剂（烷化剂。多环芳香轻类 芳吞胺类、氨基偶氨染料、亚硝肢类)：使用植物毒素（如苏铁素，黄樟素等）：使用金属（如格、像、殊、镉等）：使用RNA和DNA肿瘤病 毒；使用多种致癌性霉菌志素（其中致癌作用最强者为黄曲霉索）等，均可诱发成各种肿瘤。 诱发性肿挖模型其数量在诱发性动物模型中占首位。一般是利用致癌物质通过口服、注入、埋藏和涂抹等方式使动物发生肿瘤。 能诱发动物肿摇的病声也有不少报导，例如小虽白血病病毒(MV)、鸡白血病病击(ALV)和猫白血病病毒(LV)分别能引起大小 鼠，鸡和猫白血病。Rus鸡肉窑病毒可使田鼠、鸡、鸭、鹤鹑、猴。蛇等多种动物发生肉瘤.猫肉密肉毒(FSV)可使大鼠。猫。犬和寒发生 肉瘤。人类豪病毒能诱发小鼠。田鼠肉瘤和淋巴瘤。 (一)诱发性种瘤动物模型 1.肝德二乙基亚硝胺(DEN)诱发大白鼠肝德：取体重2502左右的封闭群大白息，雄雄不抱，按性别分笼饲并，除给普通食物外，饲 以致籍物，即用0.25%DEN水溶液灌周，剂量为10mgkg,每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用。共约4个月可 诱发成肝痘.或单用0.005%掺入饮水中口吸最8个月诱发肝德，4-2甲基氨基氨苯(DB八)诗发大鼠肝癌：用含0.06%DBA的回料喂养大鼠，句
3．国外经常取用二种近交系的杂交一代（F1）作为模型。其个体之间均一性好，对实验的耐受性强，又多少克服了近交系的缺点。但盲 目引进F1代动物对复制所要求的模型是缺乏意义的。 （五）动物进化的高级程度并不意味着所有器官和功能接近于人的程度 复制动物模型时，在条件允许的情况下，应尽量考虑选用与人相似、进化程度高的动物作模型。但不能因此就认为进化程度越高等的动物 其所有器官和功能越接近于人。例如，非人灵长类诱发动脉粥样硬化时，病变部位经常在小动脉、即使出现在大动脉也与人类分布不同。据报 导用鸽（White Gameau Pigeon）作这类模型时，胸主动脉出现的黄斑面积可达10%，镜下变化与人也比较相似，因此也广泛被研究者使 用。 （六）正确地评估动物疾病模型 应该懂得没有一种动物模型能完全复制人类疾病真实情况，动物毕竟不是人体的缩影。模型实验只是一种间接性研究，只可能在一个局部 或几个方面与人类疾病相似。因此，模型实验结论的正确性只是相对的，最终必须在人体身上得到验证。复制过程中一旦出现与人类疾病不同 的情况，必须分析其分岐范围和程度，找到相平行的共同点，正确评估哪些是有价值的。 总之，动物疾病模型这门新兴的科学正吸引着各个领域专业人员投身于这项开发工作。无论医学家、兽医学家还是生物学家，要复制动物 模型还必须学习有关知识，精于选用已知的各种模型和开发新的模型，这也应该是研究者的一项基本技能。 第四节 动物模型的复制方法 一、复制方法和应用 动物疾病模型的复制，是用人为的方法，使动物在一定的致病因素（物理的、化学的、生物的）作用下，造成动物组织、器官或全身一定 损害，出现某些类似人类疾病的功能、代谢、形态结构方面的变化或各种疾病，通过这种手段来研究人类疾病的发生、发展规律，为研究人类 疾病的预防、治疗（包括新药物试用）提供理论依据。所以动物疾病模型的复制，在医学科学研究中占有十分重要的地位。 目前我国生物医学科学研究中，动物疾病模型主要用于三个方面：即实验生物学、实验病理学和实验治疗学（新药筛选亦属于实验治疗学 范畴）。由于研究目的不同，对于疾病模型的要求也有所区别。如实验病理学，它着重于研究用某种特定方法复制出某些疾病。整个疾病复制 过程，就是它的研究内容，目的是通过疾病的复制去探讨疾病的病因学和发病原。而实验治疗学则完全不同，疾病的复制仅是它研究的开始， 因为它的主要目的是为了阐明在该病的发生发展过程中，某些治疗措施或药物的疗效如何。 诱发性动物模型的复制方法不外是用生物的、物理的、化学的和各种环境因子作用于动物而产生。 生物学因素包括细菌、病毒、寄生虫、细胞、生物毒素、激素等各种致病原，通过接种而使正常动物发生疾病。如接种细菌、病毒于敏感 动物使其产生各种传染病。目前已知的150余种人畜共患病提供了极有意义的传染病材料。从流行病学、病理学或并发症等不同角度研究，首 先要充分了解动物与人在疾病易感性和临床表现等方面的同异处。例如轮状病毒可引起婴儿急性坏死性肠类，犬感染轮状病毒后的表现只是亚 临床的。然而严重威胁幼犬的肠道病毒是细小病毒，而人对细小病毒则并不易感。 物理因素是多方面的。例如在机械力作用下产生各种外伤性脑损伤、骨折等模型，气压变动复制高空病、潜水病；温度改变产生各种烧伤 和冻伤；放射线照射可复制各型放射病，引起免疫功能抑制或诱发Spragae-Dawley系大鼠乳腺癌；闪光刺激诱发癫痫模型；噪音刺激引起听源 性高血压及改变行为记忆功能等。复制各种模型时必须严格考虑不同对象应采用的不同的刺激强度、频率和作用时间，即按设计要求摸索有关 实验条件。例如用扩张的气囊在颅内加压制作急性颅内压增高症动物模型时，应该按不同压力梯度通过几小时逐步加压，待脑的顺应性发生改 变后才出现临床“脑缺血-脑水肿”的恶性循环。盲目加压会急速发生脑疝死亡，不可能复制出脑水肿对机体代偿和失代偿的病理生理过程，这样 的模型会丧失或缺乏临床研究的价值。 化学因素可直接或间接（通过代谢产物）对机体产生有害作用。如用各种化学致癌剂诱发各种肿瘤；用各种化学毒物或毒气诱发各种中毒 性疾病；用强碱、强酸可致皮肤烧伤等。 不同品种、不同年龄的动物也存在剂量、耐受性和副作用等差异。实验者需要通过广泛收集有关信息，在预实验中摸索稳定而有效的实验 条件。研究者可根据研究目的需要，选择相应的实验方法，在健康的动物身上复制出所需要的疾病模型。诱发性疾病模型已知有数千种，复制 的方法也是多种多样的，这里仅对一些常用的、经典的人类疾病的动物模型复制方法加以简介。 二、肿瘤模型的复制方法 复制动物肿瘤的方法很多，如将实验动物用放射线照射或静脉、局部注射放射性同位素；使用各种化学致癌剂（烷化剂、多环芳香烃类、 芳香胺类、氨基偶氮染料、亚硝胺类）；使用植物毒素（如苏铁素、黄樟素等）；使用金属（如铬、镍、砷、镉等）；使用RNA和DNA肿瘤病 毒；使用多种致癌性霉菌毒素（其中致癌作用最强者为黄曲霉素）等，均可诱发成各种肿瘤。 诱发性肿瘤模型其数量在诱发性动物模型中占首位。一般是利用致癌物质通过口服、注入、埋藏和涂抹等方式使动物发生肿瘤。 能诱发动物肿瘤的病毒也有不少报导，例如小鼠白血病病毒（MLV）、鸡白血病病毒（ALV）和猫白血病病毒（FLV）分别能引起大小 鼠，鸡和猫白血病。Rous鸡肉瘤病毒可使田鼠、鸡、鸭、鹌鹑、猴、蛇等多种动物发生肉瘤。猫肉瘤肉毒（FSV）可使大鼠、猫、犬和猴发生 肉瘤。人类腺病毒能诱发小鼠、田鼠肉瘤和淋巴瘤。 （一）诱发性肿瘤动物模型 1．肝癌 二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌：取体重250g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘。按性别分笼饲养。除给普通食物外，饲 以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用。共约4个月可 诱发成肝癌。或单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌：用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲
含0.03%2 AF标准饲料. 乙基亚硝胺诱发 大鼠肝 用剂量为每日0 3~14mgg体重，混于饲料或饮水中给予， 个月后255/300大鼠发生了肝癌。亚胺甚偶氮甲苯(0AAT)诱发 鼠肝：用1%OAAF苯溶液（约0.Iml含1mg) 涂在动物的两肩钾 隔日 次。每次2一3滴 般涂100次，买验后7~8周脚而出现 个肝肿瘤，7个月以上可诱发小息肝肿瘤约55%，或用2.5 mgOAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝 癌。黄曲霉素诱发大鼠肝癌：每日饲料中含0.001 0.015ppi 混入饲料中喂6个月后，肝诱发华达80%， 胃癌甲基胆蒽诱发小鼠胃癌： 取20g左右的小鼠，无茵手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆葱(MC)线结，含MC的线结是用言通细 线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05~0.1g20甲基胆葱内浸入 10~20根线。手术埋线后4~8个月可诱发成功。用不对称亚胺，剂量为0.25mg体重，3个月后全部动物发生前胃乳头状癌，7~8个月 后有85-100%发生前胃癌。昆明种最敏感，A系次之，615系小鼠敏感性最差。此外还可用甲基亚硝基酸尿素给BD大鼠饮水中加2mgkg体 重，每周5次饮用，520天后全部大最均发生了象胃癌。 3.合管偏甲基苄基亚硝胺(MBNA)诱发大鼠合管癌：取体重100g以上的Wis大鼠，任其合用含甲基苄基亚硝胺的饮水，并将 MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75~1.5mgkg体重.80~100天可诱发成食管癌。也可用二烃黄樟素(Dihydrosafrole),它是一种制备啤 酒的调味品，在大鼠饲料中加入百万分之二干五百至一万(2500~10000ppm)黄樟素，就能引起20~75%的食管癌。用0.2%或0.005%的甲基 苄基亚硝酸水溶液，给动物经口灌喂，每天一次，大鼠灌注剂量为1mkg体重，至第27天即发现一例食管乳头状瘤，154天发现第一例食管 癌，11个月食管篇的发生率为53%： 4。违德一乙基亚硝胺(DEN)透发小息肺克：小白息每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次剂量56m/业g,DEN总剂量达到868m日 观察时间为100天左右时，发癌宰可达40%，而DEN总剂量达到1176mg,观察时间为半年左右时：发癌率可达94%。乌拉坦诱发肺腺癌：小园 (4系，1~11/2月龄)较大鼠敏感，每次每只腹腔注入109%乌拉坦生理盐水液0.1~0.3ml,间隔3~5日再注，共注2~3个月，每只小鼠用量约 为100mg,注后3个月肺腺瘤发生率为100%，而且多数为多发性，这种诱发密为良性。此外还可用气管内注入苯并花、硫酸铵气溶胶、甲基胆 蒽等诱发肺癌。如猴气管内注入3,4苯井花（苯并花为3~15mg与等量之F203混合液），每周一次，共10次，6只猴中有2只诱发肺的鳞状上 皮癌。亦有人用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入，13个月后所有大鼠都发生了肺骤癌。用0,2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内 注入，每次0.1ml(含甲基胆葱5mg)每周一次，共6次，53周后有62.5%动物发生了肺癌. 5,岛明克一甲基阳菌C)透发大品离明德：取直径2mm的硬质超米管在酒精灯上小火拉成锥形。每段长约；5cm,管内填以结 品体MC,小管一端用火封闭，以防药物外溢，尖端用针刺数孔，使MC能从小妃溢出，取体重120g左右的大白品，雌维均可，乙硅麻醉后，由 前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔较小管粗端为小的特点，稍加用力，迫使小管全部进入鼻腔内，其尖部可达鼻咽腔。不 需另加固定，即可使小管长期留于鼻腔内。待到须定时间（半年以上），或动物自行死亡时，到其鼻咽部，10%福尔马林固定，脱钙后，石蜡 包埋，进行连续切片。发癌率可达60%以上，二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌：取120左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用窄平针尖的8 号针头，从前鼻孔轻轻插入，针尖可达鼻咽腔。经注射器灌注用1%吐温-80新配的33.3%DEN混显液0.02m(含DEN6.7mg)每周1次，共15~20 次，可诱发成鼻烟篇。 6.宫颈癌取雄性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，将线穿入宫颈。经右 宫角背部穿出，使线结固定于宫颈口。线的另一端则固定于背部肌肉，缝合皮肤，挂线以后，同日开始连续注射吉霉素2~3天。以防术后感 染。至一定时间（半年左右）处死动物。宫颈组织用10%描尔马林固定，石蜡包埋，连续切片 ,结肠给四周龄的雄性大白鼠，皮下注射二甲甚苄肼（.DMH)每用一次，连续21周，每次DMH2Imgg,最后 次给药后1-4周，处死动物，降结肠部位用Boun液固定，聪水，石蜡包埋，切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加 EDTA37mg,用氢氧化纳(0.1N)液将DH调至6.S备用. 目前临床所用的抗肿药中，大多数是经动物移植性肿试验筛选而发现的。应用动物移植性钟筛选药物的优点是：使一群动物同时接 种同样量的细，生长速率比较 一致。个体关是较小，接种成话率近100%， 易于客观判断疗效，可在回种或同品系对 物中连续移植，长期保留供试验用，试验周 一均较短，试验条件易于控制等。因此日前抗肿瘤药筛选大多数采用动物移植窄作为筛选 甲。且前世上保存的动物移植融离约有40性，但储选试验国者仅 人的常的密性6 小鼎子宫颈瘤27号（U27 细跑 人肝容移植和人脑恶性胶质细 1)等 动物肿密可通过移植传代而培养出所需要的 田株。株是一 型和生长特性把趋稳定，并能在同系或同种动物中连续传代 的时实 相当于活体组织培新 长相 的 一定数量的细胞注入受体 动物腹腔形成腹水瘤或产生 式同系动物植不 生排 可结合注射肾上腺 、抗肿瘤药物和适当量的放射等方法，降低宿主免疫 排反应 移植始于 ① 接种于皮下或 但排斥作用 ②动物 免的 不能 于动 肿 个初 1983年B0dgen等人用无胸最大鼠 膜下移 人体种 全部实验仅需引！天 且命中率 这项 作为 米了榴 0年 立可 生人体 密株能防 传代件随 退化 1969年Rygaaid 首次成功地将人类 密移于无胸裸小鼠，这为异种动物肿控移植开辟了新局面。由于裸小鼠缺乏T淋巴细胞功能 人是极为理想的肿鹿移植模型材料
料中维生素B2不应超过1.5～2mg/kg，4～6月就有大量的肝癌诱发成功。2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌：给成年大鼠 含0.03%2AAF标准饲料。每日每平均2～3mg2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。二乙基亚硝胺诱发 大鼠肝癌：用剂量为每日0.3～14mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予，6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小 鼠肝癌：用1%OAAF苯溶液（约0.1ml含1mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。实验后7～8周即而出现第 一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。或用2.5mgOAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝 癌。黄曲霉素诱发大鼠肝癌：每日饲料中含0.001～0.015ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。 2．胃癌 甲基胆蒽诱发小鼠胃癌：取20g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。含MC的线结是用普通细 线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05～0.1g20-甲基胆蒽内浸入 10～20根线。手术埋线后4～8个月可诱发成功胃癌。用不对称亚硝胺，剂量为0.25ml/kg体重，3个月后全部动物发生前胃乳头状癌，7～8个月 后有85～100%发生前胃癌。昆明种最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。此外还可用甲基亚硝基醋酸尿素给BD大鼠饮水中加2mg/kg体 重，每周5次饮用，520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。 3．食管癌 甲基苄基亚硝胺（MBNA）诱发大鼠食管癌：取体重100g以上的Wistar大鼠，任其食用含甲基苄基亚硝胺的饮水，并将 MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75～1.5mg/kg体重。80～100天可诱发成食管癌。也可用二烃黄樟素（Dihydrosafrole），它是一种制备啤 酒的调味品，在大鼠饲料中加入百万分之二千五百至一万（2500～10000ppm）黄樟素，就能引起20～75%的食管癌。用0.2%或0.005%的甲基 苄基亚硝胺水溶液，给动物经口灌喂，每天一次，大鼠灌注剂量为1mg/kg体重，至第27天即发现一例食管乳头状瘤，154天发现第一例食管 癌，11个月食管癌的发生率为53%。 4．肺癌 二乙基亚硝胺（DEN）诱发小鼠肺癌：小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次剂量56mg/kg，DEN总剂量达到868mg， 观察时间为100天左右时，发癌率可达40%。而DEN总剂量达到1176mg，观察时间为半年左右时；发癌率可达94%。乌拉坦诱发肺腺癌：小鼠 （A系，1～11/2月龄）较大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1～0.3ml，间隔3～5日再注，共注2～3个月，每只小鼠用量约 为100mg，注后3个月肺腺癌发生率为100%，而且多数为多发性，这种诱发瘤为良性。此外还可用气管内注入苯并芘、硫酸铵气溶胶、甲基胆 蒽等诱发肺癌。如猴气管内注入3，4苯并芘（苯并花为3～15mg与等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次，6只猴中有2只诱发肺的鳞状上 皮癌。亦有人用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入，13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内 注入，每次0.1ml（含甲基胆蒽5mg）每周一次，共6次，53周后有62.5%动物发生了肺癌。 5．鼻咽癌 二甲基胆蒽（MC）诱发大鼠鼻咽癌：取直径2～3mm的硬质塑米管，在酒精灯上小火拉成锥形，每段长约3.5cm，管内填以结 晶体MC。小管一端用火封闭，以防药物外溢，尖端用针刺数孔，使MC能从小妃溢出。取体重120g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，由 前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔较小管粗端为小的特点，稍加用力，迫使小管全部进入鼻腔内，其尖部可达鼻咽腔。不 需另加固定，即可使小管长期留于鼻腔内。待到预定时间（半年以上），或动物自行死亡时，到其鼻咽部，10%福尔马林固定，脱钙后，石蜡 包埋，进行连续切片。发癌率可达60%以上。二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌：取120g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平针尖的8 号针头，从前鼻孔轻轻插入，针尖可达鼻咽腔。经注射器灌注用1%吐温-80新配的33.3%DEN混悬液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次，共15～20 次，可诱发成鼻咽癌。 6．宫颈癌 取雌性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，将线穿入宫颈。经右 宫角背部穿出，使线结固定于宫颈口。线的另一端则固定于背部肌肉，缝合皮肤，挂线以后，同日开始连续注射青霉素2～3天。以防术后感 染。至一定时间（半年左右）处死动物，宫颈组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片。 7．结肠癌 给四周龄的雄性大白鼠，皮下注射二甲基苄肼（Dimethlhydrazine,DMH）每周一次，连续21周，每次DMH21mg/kg。最后一 次给药后1～4周，处死动物。降结肠部位用Bouin液固定，脱水，石蜡包埋，切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加 EDTA37mg，用氢氧化纳（0.1N）液将pH调至6.5备用。 （二）移植性肿瘤动物模型 目前临床所用的抗肿瘤药中，大多数是经动物移植性肿瘤试验筛选而发现的。应用动物移植性肿瘤筛选药物的优点是：使一群动物同时接 种同样量的瘤细胞，生长速率比较一致，个体差异较小，接种成活率近100%，对宿主的影响相类似，易于客观判断疗效，可在同种或同品系动 物中连续移植，长期保留供试验用，试验周期一般均较短，试验条件易于控制等。因此目前抗肿瘤药筛选大多数采用动物移植瘤作为筛选模 型。目前世界上保存的动物移植肿瘤约有400株，但筛选试验常用者仅20～30种。据1984年统计，我国在同系、同种动物中已建立各种动物和 人的常见的瘤株64个。例如小鼠肺腺瘤（HP615）、小鼠子宫颈瘤27号（U27）、小鼠脑瘤22（B22）、小鼠淋巴细胞性血病（L615）、裸鼠 人肝瘤移植瘤和人脑恶性胶质细胞瘤（NCS—1）等。 动物肿瘤可通过移植传代而培养出所需要的肿瘤细胞株。瘤株是一种组织学类型和生长特性已趋稳定，并能在同系或同种动物中连续传代 的肿瘤细胞模型。肿瘤移植于健康动物，相当于活体组织培养，可长期保存瘤种，供实验所用。 实验中常用腹水瘤和实体瘤两种方式进行移植。对于会产生腹水的肿瘤，可将其一定数量的细胞注入受体动物腹腔形成腹水瘤或产生腹 水。实体瘤移植也是在无菌条件下，把实体瘤切成2～3mm小块，植于受体动物皮下。 自体式同系动物肿瘤植不产生排导现象。同种动物移植时可结合注射肾上腺皮质激素、抗肿瘤药物和适当量的放射等方法，降低宿主免疫 排斥反应。异种动物肿瘤移植始于Leidy（1834年），难度较大。近50年来异体移植常用下列方法：①接种于皮下或粘膜下，优点是易观察， 但排斥作用大，效果欠佳。②动物肿瘤移植于鸡胚尿囊膜。特点是较易存活，但人类肿瘤无成功报导。③人类肿瘤接种于大鼠、豚鼠、兔的眼 前房。缺点是细胞不能传代。④移植于动物脑内。肿瘤生长快，但难度大，不易观察。1983年Bodgen等人用无胸腺大鼠肾包膜下移植人体肿瘤 筛选新药，全部实验仅需11天，且命中率高，这项工作为临床病人的药物筛选带来了福音。 60年代以来国外已建立可移植性人体肿瘤数百种，这些瘤株能防止由传代伴随的形成和功能的退化。1969年Rygaaid首次成功地将人类肿 瘤移于无胸腺裸小鼠，这为异种动物肿瘤移植开辟了新局面。由于裸小鼠缺乏T淋巴细胞功能，所以是极为理想的肿瘤移植模型材料
三、心血系系疾病的动物横型 (一)动脉粥样硬代模型 常选用免。猪。大鼠、鸡。鸽、猴和犬等动物。常用的复制方法有下面几种（包括高血脂梗型） 1.高胆固醇、高脂肪饲料喂养法：是日前比校常用的方法，特点是死亡率低，可长期观察，但费时久，一般在家免、鸽、鸡等，经数周喂 养就可产生明显的高脂血症，经数月就能形成早期的动脉粥样硬化病变。大白鼠、小白鼠及犬则较避形成，如果饲料中增加蛋黄、胆酸和猪油 等，可用保讲作用为了保讲宾查的形成，在嘉脂饲料中怀可加入甲慧流氧牌宇、丙某硫氧密定.甲汽平莱丙胺、维牛宽D。铜城成游塘 等. 具体复制方法：兔诱发模型：体重2k左右，每天吸服胆固醇0.3g,4个月后肉眼可见主动球粥样硬化斑块：若每天剂量增至0.5g,3个月后 可出现斑块：若增至每天1g,可缩为2个月。在饲科中加入15%蛋菌粉.0.5%胆固醇和5%猪油，经3周后，将饲料中朋固醇减去，再暇3周，可 使主动脉斑块发生率达100%，血清胆固醇可长高至2000mg6,大白鼠诱发模型：喂服1一4%胆固醇、10%猪油、0.2%甲基硫氧嘧啶、86~ 89%基础饲料，7~10天：或喂服10%蛋白黄粉、5%猪油、0.5%阳盐、85%基础饲料，7天后均可形成高坦国醇血症。小白配诱发模型：雄性小 白鼠饲以1%胆固醇及10%猪油的高脂饲料，7天后血洁胆固宁即升为34315mg:若在饲料中再加入0.3%的图酸，连饲7天，血洁胆固醉可高达 530±36m%.鸡、鸽诱发模型：4-8周的莱克享鸡，在饲料中加入1-2%胆园醇或15%的重黄粉，再加5-10%的猪油，经过6-10周，血胆固 醇升至10004000m%,胸主动脉块发生率达100%.胆酸3及天，加甲其硫定0.1 可以产生较多动物斑块 .免疫学方法：将大白鼠主动脉匀浆给兔注射，可引起血胆固醇。B一指蛋白及甘油三脂升高。给免注射马血清10k次，共4次，每次 间隔1天，动脉内膜损伤率为88%，冠状动脉亦有粥样硬化的病变：同时给子高胆固醇饲料，病变更加明显。免饲含1%胆固的饮料，静脉 注射儿酚按类药物法：给静就斋注去甲肾上索1/日，时间为30分斜 方法是先点滴15分钟，休息5分钟后再商15分钟 一方法是每次点滴5分钟和休息5分钟， 豆复6次上两 方法持结两周均可 早现血 弹性纤维拉长、劈裂或断 裂，病变中出现坏死及 4.注入同型半跳氨酸法：给免皮下注射同型半秋氨酸硫代内脂( 1mgml的浓度) 鱼及幼鱼均可出现动陆 酰管控变窄动酰 内膜肌细胞增生、纤维组织增 生力 断 管壁变原、基质 出现成的粒状知 知在饲 同型半胱酸硫代 ,注射表面活化剂法：给大 空注射 iton ；,4:20小时后雄性大白良血清胆固 仍为正袋的 性大白鼠却为 倍 用药后24小时左右升 达最高点。 时左右恢复正 甘油三升高最强 其次是瑞脂 肪乳剂静脉注射 加入吐温·8 3,搅匀，再缓缓加入丙二醇5m1和 水的混合液，充分 可 浆因及甘油 以后血浆 逐新降低 6小时a 后略有回于 后游离胆固和忌胆固的 幼乳大白鼠法 乳幼大白 脂肪含量东 ,而甲状腺功能尚不健全的 若 T 连至正常成年大 选用过 大日赋维 体重 锐离母鼠乳， 喂养的 的的年 的作用 一般认为这种高胆因血症对甲状腺索及 而对某 还得 例如使动物脑 中枢神经系统 、高度应激状态、鸟类应用 氧化碳 脉壁内皮细胞等 动脉样硬化症动物模型的特点：除田武和地外 一般温血动物只要用适当的方法，都能形成动脉粥样硬化的斑块 变 是最早用以制造高指山 症和动脉粥样硬化症模型的动物 至今仍然多被采用。它对外源住担圈的吸收率高，可达75~95%，大白 鼠仅为40% 民血的 能力低 静脉注入胆固醇后血症可持续34天，大鼠仅为12小时，狗介于两者之间。只要给兔含胆固醇较高的 不必附加其它因素，经3 4月可形成明显的动脉样化证 而且与人体发生的病变相 ,取血检查也较方使。但是也有些缺点，如 固达到很同的 而这时内脏易于发生脂质沉着，动物寿命短，低抗力差，容易继发感染而死亡。再者，兔为 草食动物，其酯代谢与 左异天：买按友现其冠状动初两变王要呈现在心旺的小动脉，而人王友生在冠状动林的大分支 大白鼠 应用 白建立高血脂及动脉粥样硬化模型，有饲养方便、抵抗力强、食性与人相近的优点。所形成的病理改变与人早期者相 似，不易形成和 两变，易形成血程 正常大鼠的血清担固平均值为92.67士1.87mg%。单纯在饲料中增加胆圈，不易引起血清胆圈升高，更不易发生动脉粥样硬化，必 须在饲料中同时加入胆酸 增加羽固醇的吸收，始能出现高朋周醇血症，如再加抗甲状腺药物：可使血清胆周醇进一步升高。 )小白鼠用小白制造实验模型也有较容易饲养和节省药品的优点，但是取血不便，难作动态观察，所以较少采用， ④鸡鸡为杂食动物，食物品种接近于人，仅在苦通饲料中加入胆固醇，就可形成动脉粥样硬化斑快。病变发生较快，在斑块中有时伴有钙 化和形成溃疡
三、心血系系疾病的动物模型 （一）动脉粥样硬代模型 常选用兔、猪、大鼠、鸡、鸽、猴和犬等动物。常用的复制方法有下面几种（包括高血脂模型）： 1．高胆固醇、高脂肪饲料喂养法：是目前比较常用的方法，特点是死亡率低，可长期观察，但费时久。一般在家兔、鸽、鸡等，经数周喂 养就可产生明显的高脂血症，经数月就能形成早期的动脉粥样硬化病变。大白鼠、小白鼠及犬则较难形成，如果饲料中增加蛋黄、胆酸和猪油 等，可用促进作用。为了促进病变的形成，在高脂饲料中还可加入甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、苯丙胺、维生素D、烟碱或蔗糖 等。 具体复制方法：兔诱发模型：体重2kg左右，每天喂服胆固醇0.3g，4个月后肉眼可见主动脉粥样硬化斑块；若每天剂量增至0.5g，3个月后 可出现斑块；若增至每天1g，可缩为2个月。在饲料中加入15%蛋黄粉、0.5%胆固醇和5%猪油，经3周后，将饲料中胆固醇减去，再喂3周，可 使主动脉斑块发生率达100%，血清胆固醇可长高至2000mg%。大白鼠诱发模型：喂服1～4%胆固醇、10%猪油、0.2%甲基硫氧嘧啶、86～ 89%基础饲料，7～10天；或喂服10%蛋白黄粉、5%猪油、0.5%胆盐、85%基础饲料，7天后均可形成高胆固醇血症。小白鼠诱发模型：雄性小 白鼠饲以1%胆固醇及10%猪油的高脂饲料，7天后血清胆固醇即升为343±15mg；若在饲料中再加入0.3%的胆酸，连饲7天，血清胆固醇可高达 530±36mg%。鸡、鸽诱发模型：4～8周的莱克享鸡，在饲料中加入1～2%胆固醇或15%的蛋黄粉，再加5～10%的猪油，经过6～10周，血胆固 醇升至1000～4000mg%，胸主动脉斑块发生率达100%。鸽喂饲胆固醇3g/kg/天，加甲基硫氧嘧啶0.1g，可以产生较多动物斑块。 2．免疫学方法：将大白鼠主动脉匀浆给兔注射，可引起血胆固醇、β-脂蛋白及甘油三脂升高。给兔注射马血清10ml/kg/次，共4次，每次 间隔17天，动脉内膜损伤率为88%，冠状动脉亦有粥样硬化的病变；同时给予高胆固醇饲料，病变更加明显。兔喂饲含1%胆固醇的饮料，静脉 注射牛血清白蛋白250mg/kg，可加速高胆固醇饲料引起的动脉内膜病变形成。 3．注射儿茶酚胺类药物法：给兔静脉滴注去甲肾上腺素1mg/日，时间为30分钟。一种方法是先点滴15分钟，休息5分钟后再滴15分钟；另 一方法是每次点滴5分钟和休息5分钟，反复6次。以上两种方法持续两周，均可引起主动脉病变，呈现血管壁中层弹性纤维拉长、劈裂或断 裂，病变中出现坏死及钙化。 4．注入同型半胱氨酸法：给兔皮下注射同型半胱氨酸硫代内脂（dl-homocysteine thiolactone）20～25mg/kg/日（以5%葡萄糖溶液配成 1mg/ml的浓度），连续20～25天，成年兔及幼兔均可出现动脉粥样硬化的典型病变。冠状动脉管腔变窄、动脉壁内膜肌细胞增生、纤维组织增 生、弹力纤维断裂、管壁变厚、基质中出现成堆的颗粒状和纤维状异染物质。如在饲料中加入20%的胆固醇，再同时注射同型半胱氨酸硫代内 脂，则全部动物出现显著的动脉粥样硬化病变。 5．注射表面活化剂法：给大白鼠腹腔注射Triton WR1339 300mg/kg，9小时后使血清胆固醇升高3－4；20小时后雄性大白鼠血清胆固 醇仍为正常的3～4倍，而雌性大白鼠却为6倍左右；用药后24小时左右升脂作用达最高点，48小时左右恢复正常。其中以甘油三脂升高最强， 其次是磷脂、游离脂肪酸及游离胆固醇，对胆固醇脂没有影响。 6．胆固醇一脂肪乳剂静脉注射法：将胆固醇及猪油各3g在电磁加热搅拌下完全溶解后加入吐温-803g，搅匀，再缓缓加入丙二醇5ml和沸 水的混合液，充分搅拌乳化，使成100ml，经抽滤后显微镜下检查，乳剂颗粒均匀，并小于7～8μm即可应用。给兔耳缘静脉注射5ml/kg,可见血 浆胆固醇及甘油三酯立即升高。总胆固醇升高至正常的6倍，其中主要是游离胆固醇，游离胆固醇和总胆固醇的比值为90%。以后血浆总胆固醇 逐渐降低，6小时时出现一低峰，后略有回升。3～4天后游离胆固醇和总胆固醇的比值接近正常（40%左右），直到7～14天血浆胆固醇恢复正 常。 7．幼乳大白鼠法：一般乳幼大白鼠的血清胆固醇高于或成年大白的2～3倍，这是由于乳汁中脂肪含量很高，而甲状腺功能尚不健全的缘 故。若用一般饲料取代乳汁喂养，则血清胆固醇很快就能降至正常成年大白鼠的水平。选用出生25天的乳幼大白鼠，雌雄兼用，体重30～ 50g，在不脱离母鼠乳汁喂养的条件下，进行实验观察药物的降血胆固醇作用，与对照组比较效果。一般认为这种高胆固醇血症对甲状腺素及 其衍生物类药物非常敏感，而对某些胆固醇生物合成抑制剂则不敏感。 8．其它方法：还有许多因素可诱发高脂血症及动脉粥样硬化症。例如使动物脑部缺血、电刺激中枢神经系统、高度应激状态、鸟类应用大 剂量雌激素和暴露于一氧化碳环境、气囊异管损伤动脉壁内皮细胞等。 各种高脂血症、动脉粥样硬化症动物模型的特点：除田鼠和地鼠外，一般温血动物只要用适当的方法，都能形成动脉粥样硬化的斑块病 变。 ⑴兔 是最早用以制造高脂血症和动脉粥样硬化症模型的动物，至今仍然多被采用。它对外源性胆固醇的吸收率高，可达75～95%，大白 鼠仅为40%，对高血脂的清除能力低，静脉注入胆固醇后脂血症可持续3～4天，大鼠仅为12小时，狗介于两者之间。只要给兔含胆固醇较高的 饲料，不必附加其它因素，经3～4月即可形成明显的动脉粥样硬化症，而且与人体发生的病变相似，取血检查也较方便。但是也有些缺点，如 必须使血清胆固醇达到很高的水平才能形成斑块，而这时内脏易于发生脂质沉着，动物寿命短，低抗力差，容易继发感染而死亡。再者，兔为 草食动物，其酯代谢与人体的酯代谢差异较大；实验发现其冠状动物病变主要呈现在心脏的小动脉，而人主要发生在冠状动脉的大分支。 ⑵大白鼠 应用大白鼠建立高血脂及动脉粥样硬化模型，有饲养方便、抵抗力强、食性与人相近的优点。所形成的病理改变与人早期者相 似，不易形成似人体的后期病变，较易形成血栓。 正常大鼠的血清胆固醇平均值为92.67±1.87mg%。单纯在饲料中增加胆固醇，不易引起血清胆固醇升高，更不易发生动脉粥样硬化症，必 须在饲料中同时加入胆酸以增加胆固醇的吸收，始能出现高胆固醇血症，如再加抗甲状腺药物；可使血清胆固醇进一步升高。 ⑶小白鼠 用小白鼠制造实验模型也有较容易饲养和节省药品的优点，但是取血不便，难作动态观察，所以较少采用。 ⑷鸡鸡为杂食动物，食物品种接近于人，仅在普通饲料中加入胆固醇，就可形成动脉粥样硬化斑快。病变发生较快，在斑块中有时伴有钙 化和形成溃疡