6、酵母菌人工染色体:YAC可接受100 1000kb的外源DNA片段。这一特点使YAC 成为人类基因组计划及图克隆分高基 因的重要工具 ECOR CEN4 TRP1/ARS1 Ampr pYAC4 11400bps or T His 3 BamH丨 BamH I
6、酵母菌人工染色体：YAC可接受100- 1000 kb的外源DNA片段，这一特点使YAC 成为人类基因组计划及图位克隆分离基 因的重要工具 pYAC4 CEN4 Sup4 URA3 TEL His3 TEL ori Amp TRP1/ARS1 His3 ori Ampr EcoR I BamH I BamH I 11400 bps
7、①质粒及其衍生敢体 们质粒包括五个区域。1.LB与RB之间的 T-DNA.这段序列合到植物基因组中 2.质粒转移区(PT) 3.冠瘿碱代谢区; T-DNA 日 R日 4.复制原点; 2 plasmid transfer 5.毒性区。 Ti ine catabolism r
7、Ti质粒及其衍生载体 Ti质粒包括五个区域，1. LB与RB之间的 T-DNA，这段序列整合到植物基因组中； 2. 质粒转移区(PT)； 3. 冠瘿碱代谢区； 4. 复制原点； 5. 毒性区
→①一DNA区域內的所有基因与转移无 头。所以将致瘤基因全部缺失即卸甲 ( disarmed)后,将细菌抗生素的抗性 基因或其它序列插入到这个区域。形 成的T一DNA仍可将RB至LB内的序列转 移并躉合到植物基因组。 Vi区的毒性基因是TDNA转移所必 的。毒性基因可以顺式及反式两种 方式控制T-DNA转移
→T-DNA区域内的所有基因与转移无 关，所以将致瘤基因全部缺失即卸甲 (disarmed)后，将细菌抗生素的抗性 基因或其它序列插入到这个区域，形 成的T-DNA仍可将RB至LB内的序列转 移并整合到植物基因组。 →Vir区的毒性基因是T-DNA转移所必 需的，毒性基因可以顺式及反式两种 方式控制T-DNA转移
Ti质粒是约200-500kb的环状DNA分子, 很难直接使用,故对其加以改造,构 建出质粒的衍生敢体系统。广泛用作 植物基因工程中的敢体 1)双元敢体( binary vectors) 如pBin19载体,具有原核生物的卡那霉 素抗性基因(AphI)作为细菌选择标记, 真核生物的卡那霉素抗性基因(nos NptⅡ)作为植物的选择标记,pUC19的多 克隆点及一互补显色标记 (2)共整合數体( integrated vectors)
Ti质粒是约200-500kb的环状DNA分子， 很难直接使用，故需对其加以改造，构 建出Ti质粒的衍生载体系统，广泛用作 植物基因工程中的载体： （1）双元载体(binary vectors） 如pBin19载体，具有原核生物的卡那霉 素抗性基因(AphⅠ)作为细菌选择标记， 真核生物的卡那霉素抗性基因( n o s - NptⅡ)作为植物的选择标记，pUC19的多 克隆位点及α-互补显色标记 （2）共整合载体(integrated vectors)
四、基因的分离与鉴定 个基因就是编码一条多肽链的 个DNA片段,包括启动子、终止子及 内含子。 利用DNA重组技术,可从一个含有10 万个基因的大基因组中,准确地分 高出特异的单个目的基圆。分离与 鉴定基因是DNA重组中的关键步骤之
四、基因的分离与鉴定 一个基因就是编码一条多肽链的一 个DNA片段，包括启动子、终止子及 内含子。 利用DNA重组技术，可从一个含有10 万个基因的大基因组中，准确地分 离出特异的单个目的基因。分离与 鉴定基因是DNA重组中的关键步骤之 一