限制性酶据其作用特点可分为两类: 第I类:每隔一段DNA序列随机切割 双链DNA分子,没有序列特异性。很 少在基因工程中应用。 第Ⅱ类:能识别一段特异的DNA序列 准确地酶切双链DNA的特异序列。 基因工程中广泛应用
限制性酶据其作用特点可分为两类: 第Ⅰ类: 每隔一段DNA序列随机切割 双链DNA分子，没有序列特异性。很 少在基因工程中应用。 第Ⅱ类: 能识别一段特异的DNA序列 ，准确地酶切双链DNA的特异序列。 基因工程中广泛应用
5′ GAATTO=3 GAATTC 3 CTTaaG 5 3 CTTAAG 35 53 G AATTC 回纹序列 G 二 3 CTTAA 5 5 GaatTc 3 3-CTTAAG--5 图9-1限制性内切酶 ECoRI的酶切位点及酶切产物连接
图 9－1 限制性内切酶EcoRI的酶切位点及酶切产物连接 G CTTAA 5´ 3´ GAATTC CTTAAG 5´ 3´ 3´ 5´ GAATTC CTTAAG 5´ 3´ 3´ 5´ AATTC G 5´ 3´ AATTC TTAAG 5´ G 3´ C 5´ 3´ a b 回纹序列
5- CCCGGO一3 3 GGGCCC--5 平齐末端 3=c66868二3 图9-2限制性内酶Sma的识别及酶切位点
图 9－2 限制性内切酶SmaI的识别及酶切位点 CCCGGG GGGCCC 5 CCC GGG GGG CCC , 3 , 3 , , 5 , 5 , 5 平齐末端
三、载体 经限制性酶酶切的DNA片段或基因 必需与适合的载体DNA连接构成重组 DNA后,才可以高效率地进入宿主细 胞。并在其中复制、扩増、克隆 可作为DNA载体的有质粒、噬菌 体、病毒、细菌或酵母菌人工染 色体BAC、YAC等
三、载体 经限制性酶酶切的DNA片段或基因， 必需与适合的载体DNA连接构成重组 DNA后，才可以高效率地进入宿主细 胞，并在其中复制、扩增、克隆 可作为DNA载体的有质粒、噬菌 体、病毒、细菌或酵母菌人工染 色体BAC、YAC等
作为敢体,卿具备4个条件 1.具复制原点。在宿主细胞中能独立复制 ,能带动携带的外源DNA片段复制。 2.具有多克隆位点,即具有多种限制酶切 京,每一种酶的切点只有一个,用于克 隆外源DNA片段。 3.至少具有一个选择标记基因。这个基因 是抗菌素的抗性基因或某种酶的基因 而宿主细胞则没有这种基因,使有或元 就体的宿主细胞具有易鉴别的表型。 4.易从宿主细胞中回收
作为载体，需具备4个条件： 1.具复制原点，在宿主细胞中能独立复制 ，能带动携带的外源DNA片段复制。 2.具有多克隆位点，即具有多种限制酶切 点，每一种酶的切点只有一个，用于克 隆外源DNA片段。 3.至少具有一个选择标记基因，这个基因 是抗菌素的抗性基因或某种酶的基因， 而宿主细胞则没有这种基因，使有或无 载体的宿主细胞具有易鉴别的表型。 4.易从宿主细胞中回收